整体动物水平初步探讨DNMT3A在人子宫腺肌病发病过程中的作用

摘要

目的：我们的前期研究发现来自临床确诊的子宫腺肌病（adenomyosis，AM）患者异位子宫内膜组织及从组织中分离、鉴定的间质细胞（ESCs）DNMT3A的mRNA与蛋白表达均显著下调；经转染DNMT3A重组慢病毒表达载体所构建的DNMT3A过表达的ESCs+DNMT3A转基因细胞的细胞增殖率及迁移率减慢，细胞凋亡增加。然而，是否在体内也存在相似结果仍然未知，因此，我们进一步从整体动物水平探讨DNMT3A在子宫腺肌病发病过程中的作用。
　　方法：收集临床确诊的AM患者异位子宫内膜组织10例及正常对照内膜组织7例，分别分离培养ESCs，蛋白质印记法检测DNMT3A在上述ESCs中的蛋白表达水平。设立正常ESCs（正常组）、异位ESCs（异位组）；并选用DNMT3A典型低表达的异位 ESCs，转染DNMT3A过表达慢病毒及对照慢病毒分别构建GV205Flag-DNMT3A/异位ESCs（阳性组）和GV205/异位ESCs（阴性组）转基因细胞；分别注射于用17-β雌激素缓释片颈部皮下包埋人工控制生理周期的裸鼠背部皮下，每组12只裸鼠，动态观察接种细胞的增殖生长情况。
　　结果：（1） DNMT3A在异位 ESCs中的蛋白表达水平显著低于对照组ESCs；（2）蛋白质印记法检测到DNMT3A在GV205Flag-DNMT3A/异位 ESCs中高表达，确定转染成功；（3）以免疫组化法检测四组裸鼠细胞种植部位组织处人间质细胞特征性波形蛋白表达，均为阳性；（4）测量统计细胞接种部位瘤样组织，阳性组平均体积为15.375±9.546mm3，小于阴性组平均体积16.75±9.907mm3，比较无统计学差异（P>0.05）。正常对照组平均体积为18.417±8.218mm3，显著小于异位组平均体积32±16.548mm3，两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。异位组平均体积大于阴性组和阳性组，均有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：（1）DNMT3A高表达能够抑制ESCs的增殖，减缓瘤样组织的生长，在整体动物水平上进一步表明DNMT3A在AM的发生发展过程中起重要作用；（2）本实验利用人 ESCs接种至人工控制生理周期的裸鼠背部皮下进行整体动物实验，为相似疾病的动物实验研究提供参考。

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中英文缩略词表

第1章 引 言

第2章 材料与方法

2.1 主要材料及试剂

2.2 仪器设备和产地

2.3 实验步骤

第3章 实验结果

3.1 ESCs的细胞鉴定

3.2 蛋白质印记法检测ESCs中DNMT3A的蛋白表达水平

3.3转基因细胞中DNMT3A的蛋白表达情况

3.4裸鼠整体动物实验

第4章 讨论

第5章 结论

致谢

参考文献

综述: 雌激素对子宫内膜间质细胞作用机制的研究进展