基于不同标记物的免疫层析方法检测猪霍乱沙门氏菌的研究

摘要

猪霍乱沙门氏菌是一种重要的食源性致病菌，轻者能够引发胃肠炎、伤寒和腹泻，重者导致败血症，甚至死亡。猪霍乱沙门氏菌的暴发流行具有全球性，人类通过食用被猪霍乱沙门氏菌感染的食物而引起中毒。因此，研究建立高效、快速的方法检测出食物中的猪霍乱沙门氏菌能有效切断该菌的传播途径，防止中毒事件的发生。本文研究了不同纳米材料（荧光微球、磁珠、金磁微粒）在双抗夹心免疫层析快速检测方法中的应用。
　　第二章中制备了荧光微球免疫层析试纸条。在制备免疫荧光微球的过程中，根据抗体偶联率和检测线信号强度优化了抗体投入量以及偶联体系的pH。此外，根据检测线信号强度优化试纸条检测线的检测抗体浓度。结果显示：最优抗体投入量为300μg/mg、偶联体系最优pH为6，检测线最优抗体浓度为2.0 mg/mL。该方法对纯培养的猪霍乱沙门氏菌检测灵敏度为1.9×106 CFU/mL；特异性较好，对金黄色葡萄球菌有弱交叉反应。
　　第三章中将免疫磁分离技术和荧光微球免疫层析方法结合。根据捕获效率优化免疫磁珠制备中抗体的投入量和捕获过程中免疫磁珠的使用量，并研究了免疫磁珠对不同浓度猪霍乱沙门氏菌捕获效果的影响。此外，根据荧光微球试纸条的检测结果探究了热处理过程中时间和温度的影响。结果显示：最优抗体的投入量为30μg/mg，最优免疫磁珠的用量为100μg/mL，该免疫磁珠对不同浓度猪霍乱沙门氏菌的捕获效率在90％以上，最优热处理条件为75℃10 min。通过免疫磁珠对猪霍乱沙门氏菌进行富集后，荧光微球免疫层析试纸条方法能检测出浓度为1.52×105 CFU/mL的目标菌，比直接使用荧光微球试纸条方法的灵敏度提高了10倍。
　　第四章中建立了基于金磁微粒的免疫层析方法。本章节对金磁微粒进行了表征。根据捕获效率优化了免疫金磁微粒制备过程中偶联体系pH、抗体投入量，确定了捕获过程中免疫金磁微粒用量，并评价了免疫金磁微粒的特异性和对不同浓度猪霍乱沙门氏菌的捕获效率。在金磁微粒和抗体的偶联过程中，偶联体系最优pH为6，最优抗体加入量为150μg/mg。20μg/mL免疫金磁微粒被用来捕获猪霍乱沙门氏菌，免疫金磁微粒对不同浓度猪霍乱沙门氏菌的捕获效率均大于80%。猪霍乱沙门氏菌-抗体-金磁微粒复合物能直接用于免疫层析试纸条上对猪霍乱沙门氏菌进行检测，结果显示金磁微粒免疫层析方法的检测灵敏度为5×105 CFU/mL，比胶体金免疫层析方法提高了10倍。此外，金磁微粒免疫层析方法能用于牛奶样本中猪霍乱沙门氏菌的检测，检出时间为20 h。

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第一章 前言

1.1猪霍乱沙门氏菌的概述

1.2猪霍乱沙门氏菌检测方法研究进展

1.3不同标记物在免疫层析方法中的应用

1.4主要研究内容和意义

第二章 基于荧光微球的猪霍乱沙门氏菌免疫层析方法

2.1前言

2.2实验仪器和耗材

2.3 实验方法

2.4实验结果与分析

2.5小结

第三章 基于免疫磁珠富集分离猪霍乱沙门氏菌的荧光微球免疫层析方法

3.1前言

3.2 实验仪器和耗材

3.3实验方法

3.4 实验结果与分析

3.5小结

第四章 基于金磁微粒的猪霍乱沙门氏菌免疫层析方法1

4.1 前言

4.2实验仪器和耗材

4.3实验方法

4.4实验结果与分析

4.5小结

第五章 结论与展望

5.1 结论

5.2 展望

致谢

参考文献

附录1菌种目录

附录2 仪器设备

附录3 实验试剂

附录4试剂配制

个人介绍

攻读学位期间的研究成果