饲料中动物源性成分PCR检测方法的建立和应用

摘要

为进一步完善现有动物源性饲料检测体系，本研究建立了饲料中动物源性成分的PCR检测方法；并且通过实地调研、随机抽样初步了解我国奶业主产区动物源性饲料的使用情况。 本论文从以下三个方面进行研究： 一、我国部分地区动物源性饲料使用情况的初步调研： 河北、黑龙江、内蒙古自治区包头市的调研结果显示，201户养殖户中有9户养殖户在奶牛饲料中添加肉骨粉、鱼粉等动物源性饲料，占调查总数的4.48％。 二、饲料中动物源性成分PCR检测方法的建立本研究使用Qiagen公司的组织DNA提取试剂盒提取核酸。根据牛、羊、猪、鸡、鱼以及马的mtDNA的16S rRNA基因序列选用了一对通用引物，初步判断样品中是否含有动物源性成分；牛、羊引物选用已报道的特异性引物；根据猪、鸡线粒体DNA的ATPase8区特异保守区、鱼线粒体DNA 16S rRNA序列设计并筛选了猪源性特异引物Pig9044/9066F/Pig9294/9314R、鸡源性特异引物Chicken9129/9151F/Chicken9305/9327R和鱼源性特异引物NC_Fish2480/2501F/NC_Fish2565/2586R。 PCR检测结果表明，牛、羊、猪、鸡、鱼引物特异性好，扩增的目的片段大小分别为271bp、275bp、271bp、199bp、107bp；可以检出0.1％的牛、羊、猪、鸡、鱼源性成分。同时，使用氯仿和0.5％次氯酸钠溶液对检出牛源性成分的样品进行处理，最终实现肉骨粉和奶粉的区分。 三、饲料中动物源性成分PCR检测方法的应用： 本研究在我国奶业主产区的奶牛集中养殖区域北京、天津、河北等地进行实地随机抽样，共采集样品364.批次。应用本文所建立的方法对这些饲料样品进行检测，共检出动物源性成分66批次，占总样品数的18.13％；牛羊用饲料中检出猪、鱼源性成分，未检出牛、羊源性成分；动物源性饲料检出不同比例的牛、羊、猪、鸡、鱼源性成分。

目录

文摘

英文文摘

文献综述

试验部分

第一部分我国部分地区动物源性饲料使用情况调研

1反刍动物饲料安全

2我国部分地区动物源性饲料使用情况的初步调研

3.我国农业部饲料中牛羊源性成分监督检测

4.小结

第二部分饲料中动物源性成分PCR检测方法的建立

1试验目的、意义

2材料和方法

3.结果与分析

4.讨论

5.结论

第三部分饲料中动物源性成分PCR检测方法的应用

1采样地点分布

2采样方法

3采样结果

4饲料样品的检测

5.检测结果

6.讨论

7.结论

总结论

参考文献

致谢

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