链霉素胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

摘要

本研究将杂交瘤细胞株5C10接种到小鼠体内，采用体内诱生腹水法制备了含抗链霉素单抗的腹水。腹水经辛酸.硫酸铵法纯化后用全抗原对单抗进行质量鉴定，单抗蛋白质浓度为4mg/mL，抗体效价为1:1.6×105，IC50为102.28ng/ml。单抗特异性较好。 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，胶体金标记抗体经纯化后吸附在玻璃纤维素膜上；将Str-OVA(检测线)和羊抗鼠IgG(质控线)分别包被在硝酸纤维素膜上。分别经过处理干燥后与样品垫、吸水纸组装成试纸条。本实验选用直径18nm左右的胶体金标记的单抗作为检测试剂，单抗加入量15μg/mL，采用进口Ahlstrom8964玻璃纤维膜作为金吸附材料，Millipore135硝酸纤维素膜作为层析材料制成试纸条。 本研究对链霉素胶体金免疫层析试纸条的各项指标进行优化，并确定了最佳条件，成功建立胶体金免疫层析检测链霉素残留的方法。使用试纸条对SM标准液检测，检测限为100ng/ml。试纸条对对新霉素、庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星、恩诺沙星、氨苄青霉素、磺胺喹噁啉无交叉反应。 初步建立了牛奶、奶粉、蜂蜜等样本的样品处理方法，并用ELISA方法和试纸条进行验证。结果表明试纸条能够基本满足检测要求。 试纸条最大的优点是无需借助检测仪器，检测所需试剂已包被在试纸条上，检测快速、简便，10min内可出检测结果，适用于对链霉素残留进行现场检测。本研究也为其他兽药残留检测试纸条的研制提供了借鉴。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

声明

前言

1链霉素残留检测研究进展

1.1链霉素的概述

1.2链霉素残留及其限量标准

2胶体金免疫技术及其应用

2.1胶体金的性质和特点

2.2免疫层析的概念

2.3胶体金的制备

2.4金标抗体的制备、纯化及保存

2.5试纸条的检测原理

2.6试纸条材料与组装

2.7胶体金免疫层析技术在兽药残留检测中的应用

2.8 胶体金免疫层析快速诊断试纸条的展望

3主要研究内容和意义

3.1主要研究内容

3.2研究意义

1材料与方法

1.1试剂与耗材

1.2仪器与器材

1.3动物、细胞及样品材料

1.4溶液系统

1.5抗体制备与鉴定

1.6胶体金的制备与鉴定

1.7金标单抗的制备及纯化

1.8包被抗原的合成与鉴定

1.9金标抗体吸附于玻璃纤维

1.10 NC膜包被抗原和二抗

1.11最适标记金颗粒大小的选择

1.12免疫层析试纸条的组装

1.13试纸条的性能测定

1.14实际样本药物添加回收试验

2结果与分析

2.1抗体制备与鉴定

2.2胶体金的制备与鉴定

2.3金标单抗的制备及纯化

2.4链霉素全抗原的鉴定

2.5金标抗体吸附于玻璃纤维

2.6 NC膜包被抗原和二抗

2.7最适标记金颗粒大小的选择

2.8试纸条的性能测定

2.9实际样本药物添加回收检测

3讨论

3.1胶体金的制备和颗粒大小的选择

3.2金标单抗的制备及纯化

3.3膜材料的选择

3.4金标抗体稀释液的配伍和筛选

3.5封闭液和样品垫处理液的选择

3.6试纸条的性能和稳定性

3.7样品处理及检测

3.8试纸条的特点及改进方向

全文结论

参考文献

致谢