马立克氏病病毒CVI988弱毒疫苗株UL41基因的表达及鼠抗UL41多抗血清的制备

摘要

马立克氏病病毒的UL41基因与单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus typel，HSV-1)的UL41同源，编码一种分子量约为50kDa的间质蛋白。以往研究表明，HSV-1 UL41蛋白不仅具有核酸酶活性，而且在α疱疹病毒的发病机制和免疫逃避过程中发挥重要作用。为进一步研究MDV CVI988弱毒疫苗株的UL41蛋白是否参与逃避宿主免疫，首先对该基因进行了克隆、表达以及多抗的制备。 一、MDV CVI988毒株UL41基因克隆与分析 设计特异性引物，应用PCR方法从MDV CVI988株病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)总DNA中成功扩增出UL41基因基因。UL41基因序列分析表明，该基因在MDV-1中高度保守，核酸序列同源性在99.8％以上，氨基酸序列同源性在99.3％以上；并发现该基因中也具有和真核细胞核酸酶类似的XPGI结构域。 二、MDV CVI988毒株UL41基因原核表达及其多抗研制 利用原核表达载体pGEX-6P-1构建UL41基因与谷胱甘肽S转移酶(GST)融合表达子，命名为pGEX-UL41。pGEX-UL41经IPTG诱导后，通过SDS-PAGE电泳和Western blot证实UL41基因得到成功表达，其表达产物主要以包涵体的形式存在。利用电洗脱法成功获得融合目的蛋白，并以其蛋白为抗原免疫小鼠，制备了抗MDV CVI988毒株UIA1蛋白特异性多克隆抗体。 三、MDV CVI988毒株UL41基因杆状病毒真核表达 通过将UL41基因ORF克隆到杆状病毒转座载体pFastBacl中，获得的重组质粒pFastBacl-UL41，并将其转化DH10Bac感受态细胞；通过蓝白斑筛选，PCR鉴定，获得重组杆状病毒rBacmid-UL41重组DNA。rBacmid-UL41重组DNA转染Sf9昆虫细胞，获得重组杆状病毒rBac-UL41。并利用原核表达产物免疫小鼠制备的多抗血清，通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot证明了MDV CVI988UL41基因在昆虫细胞中的表达。

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文摘

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论文说明：符号说明

声明

文献综述

研究内容一:MDV UL41基因的克隆及序列分析

1材料与方法

2结果和分析

3讨论

研究内容二：MDV UL41在大肠杆菌中的表达及其多抗血清的制备

1材料与方法

2结果

3讨论

研究内容三：MDV UL41蛋白在昆虫细胞中的表达

1材料与方法

2结果

3 讨论

参考文献

研究成果

致谢