连云港及周边地区猪高热病病例中常见病毒混合感染情况的调查及PRRSV疫苗免疫、PCV2感染对猪瘟疫苗免疫的影响研究

摘要

2001年以来，连云港以及周边地区在每年的5月底到10月份，爆发一种以高热，食欲下降，呼吸困难，皮肤发红，部分妊娠母猪流产，死产为特征的猪传染病。该病可感染不同猪，发病率高，几乎达到100％；死亡率随病程、继发感染的严重程度不同而异。剖检变化以弥散性、出血性间质肺炎、淋巴结和各内脏器官不同程度出血为特征。由于发病率、病死率高，治愈率较低，容易继发或并发其他病原微生物导致死亡，无特异防制方法，从而给养猪业造成巨大的经济损失。为了弄清连云港以及周边地区猪高热病的流行情况以及PRRS疫苗和PCV-2对猪瘟免疫的影响，以便做好防控工作，本论文从以下几个方面进行了调查和研究。
　　 第一章、PRRSV和CSFV RT-PCR检测方法的建立
　　 根据GenBank中已发表的序列，设计针对猪繁殖与呼吸综合征(porcinereproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)病毒ORF7基因和猪瘟病毒(classical swine fever virus，CSFV)5'-NCR基因，设计特异性引物，建立针对上述两种RNA病毒的RT-PCR方法，可同时扩增出相应的377 bp和288 bp的目的片段。实验结果表明这两个RT-PCR方法特异、敏感、快速，具有广阔的应用前景。
　　 第二章、PPV、PCV-2、PRV多重PCR方法的建立
　　 根据GenBank中已发表的序列，针对猪伪狂犬病病毒(porcine pseudorabiesvirus，PRV)gI基因和猪细小病毒(porcine parvovirus，PPV)VP2基因的特异性引物，参考有关文献得到扩增猪圆环病毒2型(porcine circovirus type2，PCV2)ORF2基因的引物，建立针对上述三种病毒的多重PCR方法，可在一次PCR反应中扩增出相应的277 bp、511 bp、404 bp目的片段。实验结果表明该多重PCR方法特异、敏感、快速，具有广阔的应用前景。
　　 第三章2007-2009年连云港及周边地区猪高热病中常见病毒混合感染规律研究
　　 应用PCR方法，对连云港及周边地区的235份猪高热病病料(血液样品)进行检测，结果97份病料为PCV2阳性，阳性率为41.3％；146份病料为PRRSV阳性，阳性率为62.1％；103份为CSFV阳性，阳性率为43.8％；10份为PPV阳性，阳性率为4.3％；6份为PRV阳性，阳性率为2.6％；其中PCV2、PRRSV的混合感染阳性率最高，235份病料中有80份，占总数的34.0％；且有17份为PRRSV、PCV2和CSFV的三重感染，占总数的7.2％。在混合感染比例中，PRRSV和CSFV混合感染居第二，235份病料中有61份，占总数的26.0％。
　　 猪瘟是危害最为严重的猪烈性传染病之一，本次调查中CSFV的阳性率高达43.8％，其对猪高热病的协同致病作用显而易见。PCV-2对机体的影响主要造成免疫抑制，使机体的免疫力下降，造成细菌和病毒的继发感染，从而引起更严重的临床症状，从检测结果看PCV-2阳性率为41.3％。猪繁殖与呼吸综合症是由PRRSV引起的以流产、死胎、胎儿木乃伊化和呼吸道疾病为特征的传染病，PRRSV可导致猪的严重免疫抑制，在临床上混合感染十分普遍，本次检测阳性率为62.1％，流行情况是严重的。上述检测结果说明我国猪高热病的复杂性及防治的艰巨性。
　　 第四章勃林格Ingelvac PRRS活疫苗(ATCC-VR2332株)对猪瘟疫苗免疫的影响研究
　　 用勃林格Ingelvac PRRS活疫苗(ATCC-VR2332株)对猪瘟细胞苗和睥淋苗在商品猪的免疫效果的影响进行了研究，免疫后定期采集血清进行猪瘟抗体的测定，结果勃林格Ingelvac PRRS活疫苗(ATCC-VR2332株)和猪瘟细胞苗组与只免疫猪瘟细胞苗组相比，产生猪瘟抗体的滴度没有差异；勃林格Ingelvac PRRS活疫苗(ATCC-VR2332株)和猪瘟睥淋苗免疫组与只免疫猪瘟睥淋苗组相比，产生猪瘟抗体的滴度也没有差异，结果表明，勃林格Ingelvac PRRS活疫苗(ATCC-VR2332株)对猪瘟疫苗的抗体产生无影响。
　　 第五章 PCV-2感染对猪瘟疫苗免疫的影响研究
　　 选取30日龄商品猪，每15天检测一次PRRSV、PCV-2感染情况和猪瘟抗体动态变化情况，在免疫猪瘟脾淋苗2头份后28天(58日龄)，猪瘟抗体水平维持在53以上；此时检测出部分猪出现圆环病毒感染，将同批猪分为有、无圆环病毒感染的两个组，以上述猪瘟脾淋苗同剂量加强免疫一次，二免后14、28天测定血清中的抗体，发现无圆环病毒感染的猪，其猪瘟抗体水平维持在60以上，而有圆环病毒感染猪其抗体水平仅维持在及格线上(42＜X＜48)，与无圆环病毒感染组差异显著。结果表明，PCV2感染可明显降低猪瘟疫苗(脾淋苗)的免疫效果。

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文摘

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前言

第一章 PRRSV和CSFV RT-PCR检测方法的建立

1材料与方法

2结果

3讨论

第二章PPV、PCV-2、PRV多重PCR方法的建立

1材料与方法

2结果

3讨论

第三章2007年至2009年连云港及周边地区猪高热病中常见病毒混合感染情况的调查

1材料与方法

2.结果

3讨论

第四章勃林格IngelvacPRRS活疫苗对猪瘟疫苗免疫的影响研究

1材料与方法

2结果

3讨论

第五章PCV-2感染对猪瘟疫苗免疫的影响研究

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

全文小结

致谢

攻读博士学位期间公开发表或待发表的论文