力竭运动及钝挫伤对大鼠骨骼肌卫星细胞体外增殖及MSTN含量的影响

摘要

目的:研究力竭运动及钝挫伤对大鼠骨骼肌卫星细胞以及肌肉生长抑制索(MSTN)影响。 方法:选取24只wistar雄性大鼠，随机分为4组，每组6只。分别是安静对照组(control，C);力竭运动组（Exhaustive exercise group）:力竭运动组进行一次力竭性下坡跑运动均达到力竭状态，并取即刻组(Exhaustive，E0)、力竭后24h组(E24)、力竭后48h组(E48)。力竭运动组和安静对照组分别于末次力竭运动后不同时间点和安静状态下进行麻醉，宰杀并取下心肌和左侧腓肠肌，腓肠肌一分为二，一份立即进行细胞培养实验，另一份腓肠肌和心肌放在液氮保存待检测肌肉生长抑制素(MSTN)的变化。 钝挫伤组:选取3只wistar雄性大鼠，分别钝挫伤即刻组(Contusion，D0)、24h组(D24)、48h组(D48)，进行钝挫伤的操作后，将三组分别在即刻、24h、48h进行麻醉，摘取左侧腓肠肌，即刻进行肌卫星细胞培养;另取新生鼠1只，宰杀后取下左侧腓肠肌，同样进行肌卫星细胞培养。 结果:(1)肌卫星细胞培养的结果:通过分离消化大鼠肌组织，可在体外获得高纯度的具有成肌能力的肌卫星细胞。 在培养初始阶段除了新生组各组的肌卫星细胞增殖速度较慢，第五天时开始大量增殖，到第七天时增殖达到高峰，基本布满大部分培养皿，之后增殖速度下降。从各组之间比较看出，新生鼠组肌卫星细胞含量最高，增殖速度最快，在培养第二天便可见少量纺锤形的单核细胞出现;在第四天就大量增殖，当培养5天后，卫星细胞相互融合形成多核的肌管;安静对照组肌卫星细胞含量最少，且增殖速度最慢;而钝挫伤组和力竭运动组介于新生鼠组和对照组之间，且钝挫伤组肌卫星细胞数量相对较多。 (2) ELISA结果显示:一次力竭训练后与安静对照组相比，力竭纽E0、E24、E48骨骼肌和心肌中MSTN的含量均下降，均具有显著性差异(P＜0.01)。而力竭组E0、E24、E48之间没有显著性差异。 结论:(1)钝挫伤组和力竭运动组骨骼肌卫星细胞增殖比安静对照组快，数量繁殖更多。并且钝挫伤组比力竭运动组肌卫星细胞数量更多。钝挫伤和力竭运动导致的肌卫星细胞激活和损伤修复途径基本一致，但程度有所不同;新生鼠在没有外力条件下，其肌卫星细胞数量较多、增殖能力较强。说明新生鼠体内的肌卫星细胞并未处于静息状态。 (2)力竭运动和恢复期间的大鼠骨骼肌和心肌内的MSTN含量明显低于安静对照组，而力竭各组(E0、E24、E48)之间无盟著性差异。提示力竭运动可以下调MSTN含量，MSTN可能在肌卫星细胞激活及骨骼肌和心肌修复中起着负调节作用。

目录

摘要

缩略词表

前言

第一部分 文献综述

1 骨骼肌概述

1．1 骨骼肌的解剖生理

1．2 骨骼肌运动性微损伤的研究进展

1．3 骨骼肌损伤后修复再生的生物学基础

2 运动训练对骨骼肌卫星细胞的影响

2．1 骨骼肌卫星细胞概述

2．2 骨骼肌卫星细胞的分离纯化

2．3 骨路肌卫星细胞培养

2．4 肌卫星细胞的鉴定

2．5 肌卫星细胞在肌肉修复中的作用

2．6 肌卫星细胞激活与成肌分化的调控

2．7 运动训练对骨骼肌卫星细胞的影响

3 钝挫伤对骨骼肌卫星细胞及其损伤修复的影响

4 运动训练对MSTN的影响

4．1 MSTN概述

4．2 MSTN的生物功能

4．3 MSTN的作用机制

4．4 运动训练对MSTN的影晌

第二部分 实验部分

1 实验对象与方法

1．1 实验对象

1．2 动物分组

1．3 动物模型

1．4 实验取材

2 实验仪器、试剂及方法

2．1 实验仪器

2．2 实验试剂

2．3 培养基的新配制

2．4 大鼠骨骼肌卫星细胞的培养方法

2．5 酶联免疫实验的方法(ELISA)

2．6 测定蛋白含量的方法

3 数据处理

4 实验结果与分析

4．1 大鼠一般情况观察

4．2 对力竭运动及钝挫伤不同期间大鼠和新生鼠SC体外培养的结果

4．3 力竭运动及恢复期间大鼠骨骼肌MSTN的变化情况

4．4 力竭运动及恢复期间大鼠心肌中MSTN的变化情况

5 讨论与分析

5．1 骨骼肌卫星细胞的培养

5．2 力竭运动、钝挫伤和新生鼠SC体外培养增殖和分化的情况对比

5．3 力竭运动对大鼠骨骼肌MSTN的影响

5．4 力竭运动对大鼠心肌MSTN的影响

6 结论

参考文献

致谢

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