力竭运动与钝挫伤对大鼠骨骼肌卫星细胞体外增殖及Hes1/Jagged1/Pax7含量的影响

摘要

目的:
　　研究力竭运动与钝挫伤对大鼠骨骼肌卫星细胞体外增殖及Hes1、Jagged1、Pax7含量的影响。
　　方法:
　　将42只五周龄雄性SD大鼠随机分为7组，每组6只:安静对照组(control，C)、力竭运动即刻组(Exhaustive，E0)、力竭后24h组(E24)、力竭后48h组(E48)、钝挫伤即刻组(Contusion，D0)、钝挫伤24h组(D24)、钝挫伤48h组(D48)。力竭运动是进行一次力竭性下坡跑运动均达到力竭状态。安静对照组、各力竭运动组及钝挫伤组分别在安静状态、力竭后、钝挫伤后不同的时间点进行处死、取血。处死时用20％的乌拉坦麻醉，取左侧腓肠肌，将取下组织一分为二，一份立刻进行细胞培养实验，另一份先用液氮保存，后转至-80℃冰箱保存，ELISA测定血清及骨骼肌中Hes1、Jagged1、Pax7含量的变化。另取新生鼠一只，取其左侧腓肠肌进行细胞培养实验。
　　结果:
　　(1)肌卫星细胞培养结果:成功分离消化了肌组织，在体外获得高纯度具有成肌能力的肌卫星细胞;培养初期阶段，新生鼠的肌卫星细胞增殖速度最快，含量最高，培养第一天，培养皿中便可见少量纺锤形的单核细胞出现，其他各组未见明显的细胞增殖现象。新生鼠第四天大量增殖，到第五天卫星细胞相互融合形成多核的肌管;而其他各组在前期则增殖相对较慢，但第五天开始大量增殖，第七天达到高峰，基本布满大部分培养皿，之后每组的增殖速度均开始下降;安静对照组肌卫星细胞增殖最慢，含量最少，未见明显的增殖现象;力竭组与钝挫伤组介于新生鼠和安静组之间，并且钝挫伤组卫星细胞含量相对较多。
　　(2) Elisa结果:力竭运动组、钝挫伤组骨骼肌和血清中Hes1、Jagged1、Pax7的含量与安静对照组比较，显著增高，具有统计学意义(P＜0.05);力竭运动各组骨骼肌、血清中Hes1、Jagged1、Pax7的含量组间比较，E0略低于E24组与E48组，无显著差异，E24组与E48组无显著差异，不具有统计学意义;钝挫伤各组骨骼肌、血清中Hes1、Jagged1、Pax7含量组间比较，即刻组略低于24h组与48h组，无显著差异，D24组与D48组无显著差异，不具统计学意义;钝挫伤组骨骼肌和血清中Hes1、Jagged1、Pax7的含量与力竭运动组比较，钝挫伤组略高于力竭运动组，不具统计学意义。
　　结论:
　　(1)安静对照组未见明显的卫星细胞增殖。力竭运动和钝挫伤均可以激活卫星细胞，使其增殖分化，且钝挫伤对卫星细胞的刺激更强烈，增殖数量略大于力竭组。
　　(2)力竭运动组与钝挫伤组骨骼肌、血清中Hes1、Jagged1、Pax7的含量与安静对照组相比均显著增高，力竭组比钝挫伤组略低。力竭运动与钝挫伤均可以引起大鼠骨骼肌Hes1、Jagged1、Pax7含量升高，其可能在骨骼肌卫星细胞激活及骨骼肌损伤修复中起正调节作用。

目录

摘要

缩略词表

前言

第一部分 文献综述

1 骨骼肌损伤修复与肌卫星细胞的关系

1．1 骨骼肌概述

1．2 骨骼肌的损伤与修复

1．3 卫星细胞对骨骼肌损伤修复的影响

1．4 卫星细胞对骨骼肌损伤修复的影响

2 Notch信号通路与骨骼肌损伤修复的关系

2．1 Notch信号通路的概述

2．2 Notch信号通路的作用机制

2．3 Notch通路对骨骼肌损伤修复及卫星细胞的影响

3 Hes1与骨骼肌损伤修复及卫星细胞的关系

3．1 Hes1的概述

3．2 Hes1基因的调控机制

3．3 Hes1对骨骼肌损伤修复及卫星细胞的影响

4 Jagged1与骨骼肌损伤修复及卫星细胞的关系

4．1 Jagged1的概述

4．2 Jagged1的调控机制

4．3 jagged1对骨骼肌损伤修复及卫星细胞的影响

5 Pax7与骨骼肌损伤修复及卫星细胞的关系

5．1 Pax7概述

5．2 Pax7的调控机制

5．3 Pax7对骨骼肌损伤修复及卫星细胞的影响

第二部分 实验部分

1 实验对象与方法

1．1 实验对象

1．2 动物分组

1．3 建立动物模型

1．4 实验取材

2 实验仪器、试剂及方法

2．1 细胞培养实验仪器

2．2 实验试剂

2．3 试剂配制

2．4 大鼠骨骼肌卫星细胞的培养方法

2．5 酶联免疫实验的方法(ELISA)

2．6 测定蛋白含量的方法

3 数据处理

4 实验结果与分析

4．1 力竭组、钝挫伤组及新生鼠不同时期骨骼肌卫星细胞体外培养结果

4．2 力竭运动及钝挫伤不同时期大鼠骨骼肌、血清中Hes1、Jagged1、Pax7含量变化

5 讨论与分析

5．1 骨骼肌卫星细胞的培养

5．2 安静对照组、力竭运动组、钝挫伤组及新生鼠体外培养卫星细胞增殖分化情况对比

5．3 力竭运动、钝挫伤及其恢复期间大鼠Hes1、Jagged1、Pax7含量的变化

6 结论

参考文献

致谢

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