鸡肌肉中哌嗪残留液相色谱-串联质谱确证分析方法的研究

摘要

哌嗪是畜牧业中最为常用的驱虫药，临床上不合理的使用造成其残留于动物性食品中，对人类健康及生态平衡造成威胁。目前，国内外关于动物性食品中哌嗪残留检测的方法报道很少，利用液相色谱-串联质谱技术检测鸡肌肉中哌嗪的残留分析方法尚未见报道。本研究以京海黄鸡为试验素材，建立了鸡肌肉中哌嗪残留高效液相色谱-串联质谱检测法(HPLC-MS/MS)和超高效液相色谱-串联质谱检测法(UP LC-MS/MS)，为动物性食品中哌嗪残留检测标准的制定提供科学依据。主要研究结果如下:
　　1、建立了鸡肌肉中哌嗪残留提取和高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）确证检测方法。肌肉样品经乙腈与三氯乙酸混合溶液提取，正己烷去脂，Strata-X-C固相萃取小柱净化，依次用2.0％甲酸、甲醇、超纯水淋洗和10.0％氨水乙腈洗脱，氮气吹干后，复溶上机检测，以Waters SunFireTM C18（5μm，150.0mm×4.6mm i.d）为色谱柱，0.1％甲酸水溶液(A)和甲醇(B)为流动相，梯度洗脱，流速为0.4mL/min，电喷雾正离子模式(ESI+)电离，多反应监测模式(MRM)检测，外标法定量。哌嗪在鸡肌肉中1.0～200.0μg/kg范围内，其定量子离子的色谱峰面积与其浓度呈线性相关，且线性关系良好，决定系数R2=0.9997。当添加哌嗪在50.0、100.0和200.0μg/kg三个浓度水平时，平均回收率分别为86.43％±4.28％、88.63％±3.51％和82.22％±1.28％，对应的相对标准偏差(RSD)分别为4.95％、3.97％和1.56％。日内RSD在2.19％～5.96％,日间RSD在3.21％～7.29％。在HPLC-MS/MS检测技术条件下，哌嗪在鸡肌肉中的检测限(LODs)为0.3μg/kg（S/N≥3），定量限(LOQs)为1.0μg/kg（S/N≥10）。哌嗪在定量限添加水平时，回收率为76.24％±4.73％，日内和日间RSD分别为7.08％和9.16％。方法的确定限(CCα)与检测容量(CCβ)分别为103.0μg/kg和106.0μg/kg。
　　2、建立了鸡肌肉中哌嗪残留提取和超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)确证检测方法。肌肉样品经乙腈与三氯乙酸混合溶液提取，正己烷去脂，固相萃取净化。色谱柱为Waters ACQUITYUPLC(R) HSS T3（1.8μm，100.0mm×2.1 mm i.d.），0.1％甲酸水溶液(A)和甲醇(B)为流动相，梯度洗脱，流速为0.2mL/min，电喷雾正离子模式(ESI+)电离，多反应监测模式（MRM）检测，外标法定量。哌嗪在鸡肌肉中1.0～200.0μg/kg范围内，其定量子离子的色谱峰面积与其浓度呈线性相关，且线性关系良好，决定系数R2=0.9995。当添加哌嗪在50.0、100.0和200.0μg/kg三个浓度水平时，平均回收率分别为102.93％±4.70％、111.46％±5.88％和105.68％±5.15％，对应的相对标准偏差(RSD)分别为4.57％，5.28％和4.87％。日内RSD在2.43％～4.32％，日间RSD在3.61％～5.78％。在UPLC-MS/MS检测技术条件下，哌嗪在鸡肌肉中的检测限(LODs)为0.4μg/kg（S/N≥3），定量限(LOQs)为1.0μg/kg（S/N≥10）。哌嗪在定量限添加水甲时，平均回收率为83.26％±8.92％，日内和日间RSD分别为10.69％和12.83％。方法的确定限(CCα)与检测容量(CCβ)分别为106.0μg/kg和113.0μg/kg。
　　对建立的两种方法进行了比较，UPLC-MS/MS方法具有准确、高效、精密和流动相消耗低等优点，样品与杂质能够完全分离，但灵敏度略低于HPLC-MS/MS方法。两种方法均满足中国农业部、美国食品与药物管理局(FDA)和欧盟(EU)的兽药残留检测方法要求，适合鸡肌肉中哌嗪残留的测定。

目录

论文说明

摘要

符号说明

第一部分 文献综述

1 哌嗪的理化性质

2 哌嗪的药理学特性及临床应用

2．1 哌嗪的作用机理

2．2 哌嗪的临床应用

3 哌嗪的毒理学研究及不良反应

3．1 哌嗪的毒理学研究

3．2 哌嗪的不良反应

4 哌嗪在动物组织中的残留

5 哌嗪检测方法的研究

5．1 重量分析法

5．2 比色法

5．3 离子色谱法

5．4 分光光度法

5．5 气相色谱法

5．6 液相色谱法

5．7 高效液相色谱-串联质谱法

6 研究目的和意义

6．1 研究目的

6．2 研究意义

参考文献

第二部分 研究内容

第一章 鸡肌肉中哌嗪残留高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS／MS)确证分析方法的研究

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

4 结论

参考文献

第二章 鸡肌肉中哌嗪残留超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS／MS)确证分析方法的研究

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

4 结论

参考文献

全文结论

致谢

攻读硕士学位期间发表论文及获得专利情况

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