鸡蛋、鸡肌肉和牛肉中八种抗球虫药物残留液相色谱串联质谱确证分析方法的研究

摘要

本研究以京海黄鸡和中国荷斯坦牛为实验素材，建立了鸡蛋、鸡肌肉和牛肉中八种抗球虫药物（氯苯胍、拉沙洛菌素、常山酮、莫能菌素、盐霉素、甲基盐霉素、尼日利亚菌素和马杜霉素）多残留检测的高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)和超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)，为动物源性食品中抗球虫药物多残留检测标准的制定提供科学依据。主要研究结果如下:
　　1、建立了鸡蛋、鸡肌肉和牛肉中八种抗球虫药物同时提取和高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)同时确证检测方法。八种抗球虫药物在鸡蛋（蛋清、蛋黄和全蛋）、鸡肌肉和牛肉中定量限(LOQ)至100.00μg/kg特定浓度范围内，八种目标分析物的定量子离子的色谱峰面积与其浓度呈线性相关，且线性关系良好，决定系数(R2)在鸡蛋清、蛋黄、全蛋、鸡肌肉和牛肉中均分别高于0.99934、0.99933、0.99951、0.99975、0.99966、0.99974、0.99947、0.99957。八种抗球虫药物在定量限添加水平下，鸡蛋清、蛋黄、全蛋、鸡肌肉和牛肉中八种抗球虫药物平均回收率均分别高于75.38％、73.57％、71.24％、75.39％、72.49％、72.81％、71.62％和74.21％，相对标准偏差(RSD)均分别低于16.78％、12.65％、14.33％、14.68％、14.85％、18.79％、14.92％和12.68％;当八种抗球虫药物添加水平均为0.5MRL、1.0 MRL和2.0 MRL时，鸡蛋清、蛋黄、全蛋、鸡肌肉和牛肉中八种抗球虫药物平均回收率均分别为81.16％～88.30％、79.38％～89.24％、81.10％～88.25％、86.33％～97.25％、81.26％～90.89％、82.46％～92.56％、80.27％～89.21％和81.66％～89.37％;相对标准偏差均分别低于9.89％、9.13％、4.84％、5.47％、4.76％、7.54％、5.19％和5.72％;日内相对标准偏差均分别低于9.96％、9.82％、5.96％、8.19％、9.84％、7.32％、8.36％和8.81％;日间相对标准偏差均分别低于14.65％、14.83％、9.65％、9.27％、9.89％、10.12％、9.97％和9.49％。在HPLC-MS/MS检测条件下，八种抗球虫药物在鸡蛋清、蛋黄、全蛋、鸡肌肉和牛肉中检测限最高值分别为0.48、0.58、0.44、0.46、0.52、0.56、0.58和0.61μg/kg（S/N≥3），定量限最高值分别为1.60、1.92、1.28、1.56、1.78、1.85、1.89和1.97μg/kg（S/N≥10）。各组织中确定限（CCα）和检测容量(CCβ)均在最高残留限量附近（SD≤5.17％和SD≤10.34％）。
　　2、建立了鸡蛋、鸡肌肉和牛肉中八种抗球虫药物同时提取和超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时确证检测方法。八种抗球虫药物在鸡蛋（蛋清、蛋黄和全蛋）、鸡肌肉和牛肉中定量限(LOQ)至100.00μg/kg特定浓度范围内，八种目标分析物的定量子离子的色谱峰面积与其浓度呈线性相关，且线性关系良好，决定系数(R2)在鸡蛋清、蛋黄、全蛋、鸡肌肉和牛肉中均分别高于0.99947、0.99947、0.99961、0.99959、0.99969、0.99979、0.99947、0.99957。八种抗球虫药物在定量限浓度添加水平下，鸡蛋清、蛋黄、全蛋、鸡肌肉和牛肉中八种抗球虫药物平均回收率均分别高于75.24％、72.26％、72.34％、73.28％、74.20％、80.92％、72.32％和71.96％，相对标准偏差均分别低于12.06％、11.73％、10.36％、12.38％、13.25％、12.16％、11.28％和11.39％;当八种抗球虫药物添加水平均为0.5MRL、1.0 MRL和2.0 MRL时，鸡蛋清、蛋黄、全蛋、鸡肌肉和牛肉样品中八种抗球虫药物平均回收率均分别为84.07％～88.19％、77.57％～89.07％、82.35％～91.22％、87.62％～96.80％、86.846％～99.52％、88.99％～102.74％、82.16％～88.71％和81.98％～89.15％;相对标准偏差均分别低于7.31％、6.40％、7.40％、8.75％、8.67％、7.98％、8.61％和8.52％;日内相对标准偏差均分别低于9.96％、7.89％、8.98％、9.87％、9.77％、8.55％、9.21％、9.87％;日间相对标准偏差均分别低于13.37％、10.46％、10.79％、11.39％、10.80％、12.71％、11.51％和10.91％。在UPLC-MS/MS检测条件下，八种抗球虫药物在鸡蛋清、蛋黄、全蛋、鸡肌肉和牛肉中检测限最高值分别为0.33、0.34、0.38、0.32、0.29、0.31、0.28和0.35μg/kg（S/N≥3），定量限最高值分别为1.10、1.13、1.25、1.08、0.99、0.95、1.02和1.21μg/kg(S/N≥10)。各组织中确定限（CCα）和检测容量(CCβ)均在最高残留限量附近（SD≤5.09％和SD≤10.18％）。
　　两种方法经比较研究发现，UPLC-MS/MS方法具有高效、准确、特异性强和流动相消耗低等优点，八种目标分析物与杂质能够完全分离，且灵敏度略高于HPLC-MS/MS方法。两种方法均满足中国农业部、美国食品与药物管理局(FDA)和欧盟(EU)的兽药残留检测方法要求。

目录

论文说明

摘要

符号说明

第一部分 文献综述

1 理化性质

1．1 氯苯胍的理化性质

1．2 常山酮的理化性质

1．3 拉沙洛菌素的理化性质

1．4 莫能菌素的理化性质

1．5 尼日尼亚菌素的理化性质

1．6 盐霉素的理化性质

1．7 甲基盐霉素的理化性质

1．8 马杜霉素的理化性质

2 药理学特性及毒副作用

2．1 聚醚类抗生素的药理学特性及毒副作用

2．2 常山酮药理学特性及毒副作用

2．3 氯苯胍的药理学特性及毒副作用

3抗球虫药物检测方法的研究

3．1 微生物学检测法

3．2 紫外分光光度法

3．3 免疫学检测法

3．4 薄层色谱法(TLC)

3．5 高效液相色谱法(HPLC)

3．6 高效液相色谱法-串联质谱法(HPLC-MS／MS)

3．7 超高效液相色谱法-串联质谱法(UPLC-MS／MS)

4 研究目的和意义

4．1 研究目的

4．2 研究意义

参考文献

第二部分 研究内容

第一章 八种抗球虫药物残留HPLC-MS／MS确证方法的研究

1．材料与方法

2．结果与分析

3 讨论

4 结论

参考文献

第二章 八种抗球虫药物残留UPLC-MS／MS确证方法的研究

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

4 结论

参考文献

全文结论

致谢

攻读硕士学位期间发表论文

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