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【6h】

基于RNA干涉技术的新型番茄抗枯萎病生物制剂开发

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目录

摘要

1.1.1番茄的起源与栽培

1.1.2番茄的价值

1.2番茄枯萎病的症状及研究进展

1.2.1番茄枯萎病的病原菌及症状

1.2.2番茄枯萎病的防治策略

1.2.3番茄枯萎病病原菌与寄主番茄的互作

1.3小RNA(sRNA)在植物抗病过程中的功能

1.3.1 sRNA的功能和分类

1.3.3 miRNA作为调控分子跨界参与寄主-病原菌互作

1.4 RNA干扰调节植物免疫

1.4.2 RNAi的应用

1.5本研究的目的及意义

2.1.1植物材料及其生长条件

2.1.2病原菌材料及其生长

2.1.3载体

2.2实验方法

2.1.1番茄种子灭菌

2.1.2尖孢镰刀菌侵染番茄材料

2.2.4 Northern blot

2.2.5番茄根部原生质体分离

2.2.7大肠杆菌DH5α感受态制备和转化

2.2.8根癌农杆菌LBA4404感受态制备和转化

2.2.9根癌农杆菌GV3101感受态制备和转化

2.2.10烟草共表达载体的构建和烟草瞬时表达

2.2.11病毒介导的基因沉默(VIGs)载体构建和表达

2.2.12蛋白免疫印迹杂交

2.2.13番茄CRISP/Cas9基因敲除载体构建

2.2.14番茄过表达载体构建

2.2.15农杆菌介导的番茄转化

2.2.16抗体制备

2.2.17尖孢镰刀菌DNA提取

2.2.18尖孢镰刀菌原生质体转化

2.2.19番茄基因组DNA提取

2.2.20 RNA-IP

2.2.21番茄枯萎病病害等级划分

3.1.1文库构建及测序分析

3.1.2 folmiR1的挖掘

3.2寄主番茄中的靶基因的验证

3.2.1 folmiR1在寄主番茄中的靶基因预测

3.3靶基因功能研究及应用

3.3.1 folmiR1靶基因功能研究

3.3.2靶基因转基因番茄的构建

3.4病原菌小RNA跨界调控番茄枯萎病抗性作用机制的探索

3.4.1模式植物拟南芥中folmiR1作用机制的探索

3.4.2番茄中参与folmiR1作用机制基因的初步筛选

3.4.3候选基因抗体制备

3.5 FOL中小RNA合成相关基因的敲除

4讨论

4.1番茄尖孢镰刀菌小RNA跨界调控番茄抗枯萎病的功能

4.2以RDR1为靶标的新型抗尖孢镰刀菌生物制剂的探索

4.3番茄尖孢镰刀菌小RNA跨界调控番茄抗枯萎病的机理初探

5全文总结

参考文献

7附录

致谢

9攻读学位期间发表的学术论文目录

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