论文说明
摘要
第一章文献综述
1奶牛乳腺炎的病因及危害
1．1病原微生物因素
1．2饲养管理因素
1．3奶牛自身因素
1．4奶牛乳腺炎的危害
2奶牛乳腺炎治疗技术研究进展
3奶牛溶菌酶的研究进展
3．1奶牛溶菌酶的生物学功能
3．2奶牛溶菌酶的应用
4奶牛气管抗菌肽的研究进展
4．1抗菌肽生物学功能
4．2抗菌肽的应用
5重组质粒应用于治疗奶牛乳腺炎的设想
第二章治疗奶牛乳腺炎表达质粒的构建
1材料
1．1血样、载体与细胞
1．2主要试剂
1．3主要仪器
2方法
2．1引物设计与合成
2．2基因克隆模板获取
2．3奶牛乳腺特异性表达启动子(BLG)基因序列的克隆与鉴定
2．4 Lyz基因编码序列的克隆与鉴定
2．5 TAP基因编码序列的克隆与鉴定
2．6 Lyz／TAP基因乳腺特异性表达质粒的构建
3结果与分析
3．1奶牛BLG启动子序列PCR扩增与序列分析
3．2奶牛Lyz基因编码序列PCR扩增与重组质粒鉴定
3．4奶牛Lyz／TAP基因乳腺特异性表达质粒pBLG-EGFP-N1-Lyz／TAP的鉴定
4讨论
4．1目的基因的选择
4．2乳腺特异性表达启动子的筛选
5小结
第三章重组质粒转染细胞表达活性及抗菌效果
1材料
1．1乳腺组织与细胞
1．2主要试剂
1．3主要仪器
2方法
2．1奶牛乳腺原代上皮细胞分离培养与纯化
2．2 Lyz／TAP重组质粒在乳腺上皮细胞的特异性表达
2．3 Lyz／TAP重组质粒转染奶牛乳腺上皮细胞的抗菌效果
3结果与分析
3．1 Lyz／TAP基因在奶牛乳腺上皮细胞中的特异性表达
3．2 Lyz／TAP重组质粒转染奶牛乳腺上皮细胞表达量分析
3．3 Lyz／TAP重组质粒转染奶牛乳腺上皮细胞的抗菌效果分析
4讨论
4．1重组质粒在奶牛乳腺上皮细胞的特异性表达
4．2重组质粒转染对乳腺上皮细胞抗菌能力的影响
5小结
第四章Lyz／TAP重组质粒小鼠乳腺表达及安全性评价
1材料
1．1实验动物
1．2主要试剂
1．3主要仪器
2方法
2．1小鼠体内转染Lyz／TAP重组质粒
2．2 Lyz／TAP重组质粒在小鼠乳腺组织中的特异性表达
2．3 Lyz／TAP重组质粒对小鼠的安全性评价
3结果与分析
3．1荧光定量PCR和Western Blot实验结果
3．2 Lyz／TAP重组质粒对小鼠行为活动的影响
3．3 Lyz／TAP重组质粒对小鼠呼吸运动的影响
3．4 Lyz／TAP重组质粒对小鼠体重的影响
3．5 Lyz／TAP重组质粒对小鼠血液指标的影响
3．6 Lyz／TAP重组质粒对小鼠脏器指数的影响
4讨论
4．1重组质粒在小鼠乳腺组织的特异性表达
4．2重组质粒对小鼠安全性的影响
5小结
第五章全文结论
参考文献
致谢
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