生长抑素类似物基因治疗胰腺癌的试验研究

摘要

本文研究目的：利用携带SSTR2基因的重组腺病毒载体Adeno-X-SSTR2转染胰腺癌细胞株及裸鼠胰腺癌皮下模型，使用SSTR2特异激动剂NC-8-12和生长抑素类似物奥曲肽，观察其在体外、体内实验中是否能取得抑制胰腺癌细胞增殖的效果。　　方法：构建重组携带SSTR2基因的肿瘤增殖缺陷型腺病毒载体Adeno-X-SSTR2，经过扩增和纯化技术，在体外分别感染胰腺癌细胞株MIA-PaCa-2、AsPC-1，观察不同剂量NC一8一12和奥曲肽(10-aM、10-gM)对转染和未转染SSTR2基因的胰腺癌细胞株是否有抑制作用；建立体外转移模型，观察NC-8．12对模型中转染了SSTR2基因的胰腺癌细胞转移能力的影响；RT-PCR法半定量和免疫细胞学检测不同浓度NC一8一12和奥曲肽(0．10、0．20、0．40、0．80μg／m1)对胰腺癌细胞株MIA-PaCa-2转染SSTR2基因前后凋亡抑制蛋白Survivin表达量的影响；建立裸鼠胰腺癌皮下模型，分为转染和未转染SSTR2基因的两组，皮下分别给予不同剂量NC一8—12和奥曲肽(50、100、200μg／kg／d)，给药时间共三周，末次给药一周后处死裸鼠，设置盐水组为对照组，观察肿瘤体积和重量的变化；免疫组织化学法检测肿瘤组织内SSTR2表达情况。　　结果：重组腺病毒载体Adeno-X-SSTR2能高效转染胰腺癌细胞株MIA-PaCa-2和AsPC—l，转染的两株胰腺癌细胞均能表达SSTR2mRNA及其蛋白；在体外实验中NC．8—12和奥曲肽对未转染SSTR2基因胰腺癌细胞株的生长无抑制作用(P>0．05)；在转染了SSTR2基因的胰腺癌细胞株中，NC-8-12和奥曲肽在10-8M剂量时可以明显抑制胰岛素引起的肿瘤细胞增殖(P<0．05)；在体外转移模型中NC-8-12对转染了SSTR2基因的胰腺癌细胞株的转移过程无抑制作用(P>0．05)；在不同浓度NC一8—12和奥曲肽作用下，未转染SSTR2基因胰腺癌细胞株的Survivin表达量无明显变化(P>0．05)，转染了SSTR2基因胰腺癌细胞株的Survivin表达量明显下调(P<0．05)；在裸鼠皮下模型实验中，NC一8—12和奥曲肽对未转染SSTR2基因的胰腺癌细胞无抑制作用(P>O．05)；在转染了SSTR2基因的胰腺癌细胞中，NC一8．12和奥曲肽在200ug／kg/d剂量下可以明显抑制肿瘤细胞增殖(P<0．05)，在以上实验中NC．8．12较奥曲肽表现出了更强的抑制肿瘤细胞增殖及促进肿瘤细胞凋亡的趋势。　　结论：　　①携带SSTR2基因的肿瘤增殖缺陷型腺病毒载体Adeno-X-SSTR2可以高效转染胰腺癌细胞株MIA-PaCa-2、AsPC0。　　②在体外实验中，NC一8．12和奥曲肽可以明显抑制转染了SSTR2基因的胰腺癌细胞的增殖。　　③NC-8-12和奥曲肽作用于转染了SSTR2基因的胰腺癌细胞后，可以明显下调Survivin表达量，这可能是NC一8—12和奥曲肽诱导胰腺癌细胞凋亡的重要机制。　　④一定剂量的NC一8．12和奥曲肽(200ug／kg/d)对裸鼠体内转染了SSTR2基因的胰腺癌细胞的生长有明显抑制作用。

目录

文摘

英文文摘

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前言

第一部分重组携带生长抑素Ⅱ型受体基因的肿瘤增殖缺陷型腺病毒载体的构建及转染

第二部分NC-8-12、奥曲肽影响胰腺癌细胞株生长的体外实验研究

第三部分NC-8-12、奥曲肽对荷瘤裸鼠体内胰腺癌细胞生长的影响

结论

参考文献

附图

综述：生长抑素类似物与胰腺癌基因治疗

研究生期间发表的文章

英文缩写

致谢