自噬/溶酶体途径在海人藻酸受体介导的神经兴奋性毒性中的作用

摘要

本文研究了自噬/溶酶体途径在海人藻酸受体(KA受体)介导的神经兴奋性毒性中的作用。采用脑立体定位纹状体内给药法，建立KA受体介导的大鼠神经兴奋性毒性模型，DNAladder法观察不同剂量KA所引起的DNA核小体间降解，透射电镜观察纹状体神经元中自噬体形成和溶酶体激活，WesternBlot检测cathepsinB、cathepsinL的蛋白表达，双标记免疫组化法观察cathepsinB的表达定位。底物活性测试法检测自噬体抑制剂3-methyladenine(3-MA)和溶酶体酶cathepsinB抑制剂Z-FA-FMK对模型大鼠纹状体中cathpsinB表达的影响，DNAladder法及尼氏染色法观察3-MA和Z-FA-FMK对模型大鼠纹状体神经元的保护作用。免疫组化法检测3-MA和Z-FA-FMK对模型大鼠纹状体内溶酶体相关膜蛋白Lamp-1和抗凋亡基因Bcl-2表达的影响，WesternBlot检测3-MA和Z-FA-FMK对模型大鼠纹状体内Bcl-2、caspase-3、cyto-c表达的调节。研究结论：KA受体介导的神经兴奋性毒性导致的神经元凋亡与自噬和溶酶体的激活有关，自噬体抑制剂和溶酶体酶抑制剂可通过影响自噬/溶酶体介导的细胞信号机制抑制凋亡的发生，从而对KA所致的大鼠纹状体神经元损伤起保护作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：资助

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研究背景

第一部分KA受体介导的神经兴奋性毒性对自噬体及溶酶体的影响

一.KA受体介导的神经兴奋性毒性对神经元凋亡的影响

二、KA受体介导的神经兴奋性毒性对自噬体形成的影响

三、KA受体介导的神经兴奋性毒性对溶酶体激活的影响

小结

第二部分自噬体抑制剂3-MA与溶酶体酶特异性抑制剂Z-FA-FMK对神经兴奋性毒性模型大鼠纹状体神经元的影响

一、3-MA和Z-FA-FMK对神经兴奋性毒性模型大鼠纹状体神经元组织蛋白酶B活性的影响

二、3-MA和Z-FA-FMK对神经兴奋性毒性模型大鼠纹状体神经元凋亡的影响

三、3-MA和Z-FA-FMK对神经兴奋性毒性模型大鼠纹状体神经元损伤的影响

小结

第三部分自噬体抑制剂3-MA与溶酶体酶特异性抑制剂Z-FA-FMK减弱神经兴奋性毒性模型大鼠纹状体神经元凋亡的机制

一、3-MA和Z-FA-FMK对模型大鼠纹状体神经元溶酶体相关膜蛋白表达的影响

二、3-MA和Z-FA-FMK对神经兴奋性毒性模型大鼠纹状体神经元凋亡相关蛋白的影响

三、3-MA和Z-FA-FMK对神经兴奋性毒性模型大鼠纹状体神经元线粒体释放细胞色素C的影响

小结

讨论

结论

参考文献

攻读学位期间发表的论文

附录一综述：The role of caspase and calpainin neuronal apoptosis and pathogenesis of Huntington's disease

附录二论著：Lysosomal enzyme cathepsin B is involved in kainic acid-induced excitotoxicity in rat striatum

附录三英文缩写词表

致谢