Celecoxib增强胶质瘤细胞SHG44和U87-MG对γ射线的敏感性及其机制研究

摘要

目的：本课题通过研究COX-2选择性抑制剂celecoxib对胶质瘤细胞SHG44和U87-MG增殖能力的影响，探讨celecoxib对细胞辐射敏感性的影响；通过对celecoxib作用后细胞COX-2 mRNA表达水平及60Co-γ线照射后细胞周期以及周期调控相关蛋白p53，cyclinD1，cyclinB1表达水平的检测，、对celecoxib增敏机制进行初步探讨。 方法： (1)利用MTT法检测celecoxib对胶质瘤细胞SHG44和U87-MG存活分数的影响； (2)克隆形成法检测胶质瘤细胞的辐射敏感性、celecoxib对细胞辐射敏感性的影响； (3)应用反转录聚合酶链反应(reverse transcriptase PCR,RT-PCR)法检测celecoxib对60Co-γ线照射后细胞COX-2 mRNA表达水平的影响； (4)用流式细胞仪检测celecoxib对60Co-γ线照射后细胞周期分布改变； (5)应用WesternBlot法研究celecoxib对60Co-γ线照射后细胞周期调控相关蛋白p53，cyclin D1，cyclinB1的影响； 结果： (1)Celecoxib的细胞增殖抑制作用具有浓度依赖性，其抑制作用随浓度升高而增加；相同照射剂量下，细胞克隆形成率随celecoxib浓度增加而减小，相同celecoxib浓度下，细胞克隆形成率随照射剂量增加而减小，celecoxib浓度与辐射剂量对胶质瘤细胞的辐射增敏效应存在交互作用；存活率为O．5时，SHG44和U87-MG细胞的辐射增强系数均随celecoxib浓度增加而升高； (2)与对照组相比，celecoxib抑制细胞COX-2 mRNA表达水平；与单独照射组相比，celecoxib抑制60Co-γ线照射后细胞COX-2 mRNA表达水平； (3)与对照组相比，celecoxib处理两种细胞后G1期细胞比例均上升；与单独照射组相比，celecoxib能降低辐射诱导的细胞G2／M期阻滞； (4)Celecoxib处理后细胞cyclinD1蛋白水平均明显降低，p53、cyclinB1蛋白水平均无明显变化；celecoxib联合60Co-γ线照射相比于单独照射，细胞cyclinB1蛋白水平明显降低。 结论： (1)低浓度celecoxib对脑胶质瘤细胞无增殖抑制作用，较高浓度celecoxib剂量信赖性抑制细胞增殖；celecoxib能提高两种脑胶质瘤细胞对60Co-γ射线的辐射敏感性，50μmol／Lcelecoxib对两种细胞均有较好的辐射增敏作用； (2)Celecoxib对胶质瘤细胞的辐射增敏机制与其抑制COX-2 mRNA表达水平密切相关，可能通过影响COX-2蛋白表达或其上游的底物、酶，抑制了射线诱导的COX-2蛋白上调，导致对胶质瘤细胞的辐射增敏作用； (3)Celecoxib能诱导两种胶质瘤细胞G1期阻滞，celecoxib抑制辐射诱导活化的细胞G2／M期阻滞效应，使更多辐射损伤细胞直接进入有丝分裂期，没有得到足够修复时间而死亡； (4)Celecoxib降低胶质瘤细胞cyclinD1蛋白表达水平；celecoxib联合照射降低辐照后细胞内cyclinB1蛋白表达水平，提示celecoxib可通过对G2期调控关键因子cyclinB1的抑制，减弱辐射诱导的G2／M期阻滞效应，发挥辐射增敏作用。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

第一部分：Celecoxib对60Co-γ线照射后脑胶质瘤细胞的增殖抑制作用

第二部分：Celecoxib对60Co-γ线照射后脑胶质瘤细胞COX-2 mRNA表达水平的影响

第三部分：Celecoxib对60Co-γ线照射后脑胶质瘤细胞周期进程的影响

第四部分：Celecoxib对60Co-γ线照射后脑胶质瘤细p53,cyclinD1,cyclinB1蛋白表达水平的影响

结论

参考文献

COX抑制剂的辐射增敏作用

研究生期间发表的论文

致谢