自噬的增龄性改变与Rotenone致大鼠DA能神经毒性的关系

摘要

第一部分：增龄和Rotenone对SD大鼠黑质纹状体组织形态学和氧化应激水平的影响目的：通过构建不同增龄组SD大鼠鱼藤酮(Rotenone)染毒模型，观察大鼠黑质组织形态学和氧化应激损伤的增龄性变化。 方法：雄性SD大鼠，分别构建3、12、20月龄组，每组20只，随机分为自然增龄组和Rotenone处理组，Rotenone(1.0 g·L-1)溶解于二甲亚砜：生理盐水(2：1)的混合溶剂，自然增龄组皮下注射无Rotenone的混合溶剂，处理组皮下注射Rotenone(1.0 mg·kg-1·d-1)，连续给药28 d，每周停药1 d，构建大鼠Rotenone染毒模型。记录大鼠体重变化；观察大鼠行为学变化；大鼠黑质连续切片，酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase，TH)免疫组织化学染色并计数TH阳性细胞数；生化分析检测黑质组织氧化应激损伤。 结果：1．所有Rotenone注射大鼠出现主动活动减少，动作迟缓，弓背状姿势等帕金森病症候群特征，自然增龄组则无上述改变；自然增龄组大鼠体重上升，而Rotenone处理组大鼠先出现体重下降，随着时间的延长体重逐渐恢复到一定水平并保持不变，但始终低于对照组(P<0.01)。2．在自然增龄过程中，大鼠黑质TH阳性细胞计数以12月龄组为最高，各组与12月龄组相比较显示：3月龄组低于12月龄组(P<0.05)；20月龄组显著低于12月龄组(P<0.01)。Rotenone处理后各年龄组TH阳性细胞计数均显著降低(P<0.01)，且以20月龄组最为显著。3．自然增龄组SOD和CAT水平以3月龄最高，各组与3月龄组比较显示：12月龄组无显著差异(P>0.05)，20月龄组显著低于3月龄组(P<0.05)；Rotenone处理后各年龄组SOD活力和CAT活性均显著升高，与相应的自然增龄组相比有显著差异(P<0.01)，其中20月龄组SOD活力和CAT活性最高。 结论：1。R0tenone对多巴胺能神经元具有毒性作用。老龄大鼠对Rotenone毒性表现出较高的行为学敏感性。2．增龄过程中SD大鼠黑质DA能细胞计数下降；Rotenone在老龄大鼠引起更加严重的黑质纹状体DA能系统损害；老龄大鼠对Rotenone的高敏感性可能与持续增高的氧化应激水平有关。 第二部分：增龄和Rotenone对SD大鼠黑质纹状体多巴胺能神经元自噬/溶酶体和凋亡相关蛋白的影响 目的：研究增龄和Rotenone对SD大鼠黑质纹状体多巴胺能神经元自噬/溶酶体和凋亡相关蛋白的影响。 方法：透射电镜观察纹状体神经元中自噬体形成和溶酶体激活，免疫组化法检测纹状体内caspase-3的表达，Western Blot检测caspase-3及微管相关蛋白轻链-3(LC3)的蛋白水平。 结果：1．透射电镜显示Rotenone处理后大鼠纹状体可见自噬小体和溶酶体数目增多，线粒体肿胀变形。2．免疫组化结果显示，经Rotenone处理大鼠纹状体内caspase-3表达升高。3．Western Blot结果显示：自然增龄过程中caspase-3在20月龄组表达上调(P＜0.01)；Rotenone处理后各组大鼠纹状体caspase-3表达上调，以20月龄组最为显著，与相应的自然增龄组相比有显著差异(P＜0.01)；自然增龄组大鼠纹状体内LC3表达在20月龄组下降(P＜0.01)；与自然增龄组相比，Rotenone处理后各组大鼠纹状体LC3表达上调(P＜0.01)，其中12月龄组最为显著，而20月龄组最低； 结论：Rotenone处理后大鼠自噬活性代偿性升高以避免过度的凋亡，但老龄大鼠自噬活性失代偿，老龄大鼠的这一变化参与了DA能神经元对Rotenone神经毒性的易感性。

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论文说明：英汉主要缩略词表

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前言

第一部分增龄和Rotenone对SD大鼠黑质纹状体组织形态学和氧化应激水平的影响

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第二部分增龄和Rotenone对SD大鼠黑质纹状体多巴胺能神经元自噬/溶酶体和凋亡相关蛋白的影响

材料与方法

结果

讨论

参考文献

结论

自噬/溶酶体途径参与多巴胺能神经元氧化易损性机制研究进展

在读期间撰写论文和科研情况

致谢