Ad-VEGF165的构建及体外转染大鼠骨髓源性血管内皮祖细胞的基础研究

摘要

目的：构建携带血管内皮生长因子165(VEGF165)的重组腺病毒(Ad-VEGF165)，Ad-VEGFl65体外转染大鼠骨髓源性血管内皮祖细胞(EPCs)，观察转染后细胞VEGF蛋白的表达情况以及重组腺病毒对EPCs生长的影响。 方法：利用pAdEasy系统构建携有血管内皮生长因子165(VEGF165)的重组腺病毒载体。HEK293A细胞包装、重组、扩增腺病毒颗粒，荧光显微镜下观察绿色荧光表达。对其进行PCR、基因测序鉴定。EGM-2MV培养基培养扩增大鼠骨髓源性EPCs。Ad-VEGF165体外转染EPCs，荧光显微镜下观察绿色荧光表达，激光共聚焦测转染效率，MTT法测MOI及对生长活性的影响，ELISA检测上清中VEGF的表达。 结果：经酶切鉴定、基因测序及绿色荧光观察说明成功构建了Ad-VEGF165。Ad-VEGF165成功转染EPCs，转染24h后在荧光显微镜下可见绿色荧光，增殖实验及细胞形态观察证实1：50是合适的转染比率。当MOI为50时其转染效率为57.4％。ELISA法检测转染VEGF165后的EPCs其上清液中VEGF蛋白浓度明显升高。 结论：成功构建了Ad-VEGF165。Ad-VEGF165能有效转染EPCs。一定的转染比率对EPCs生长增殖有一定促进作用。转染后的EPCs高表达VEGF蛋白。

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前言

材料和方法

结果

讨论

结论

综述 血管内皮生长因子(VEGF)及其生物学特性

参考文献

攻读学位期间公开发表的论文

附图

致谢