静脉输注凋亡细胞对异种心脏移植免疫排斥反应的作用研究

摘要

目的：通过建立豚鼠到大鼠腹腔心脏移植模型，采用静脉输注豚鼠凋亡细胞的方法预处理受体，研究凋亡细胞对异种心脏移植免疫排斥反应的影响，探讨异种心脏移植免疫耐受的机制。 方法：CD4+CD25+调节性T细胞检测：取豚鼠脾细胞，分四组，分别为A组(空白组)，B组(豚鼠正常脾细胞)，C组(豚鼠死脾细胞)，D组(豚鼠凋亡脾细胞)经后肢静脉输注入SD大鼠，每组5只，输注后检测CD4+CD25+调节性T细胞的时间点为输注后0天、3天、7天、11天、15天，筛选CD4+CD25+调节性T细胞体内浓度最高值时的天数为心脏移植时间点。移植前检测SD大鼠体内白介素10(IL-10)和转化生长因子β1(TGF-β1)浓度。供受体混合淋巴细胞反应(MLR)：以SD大鼠的淋巴细胞作为MLR的反应细胞，豚鼠脾细胞(正常细胞、死细胞、凋亡细胞)作为MLR刺激细胞，混合培养后检测反应细胞的增殖情况。 心脏移植：供体豚鼠和受体SD大鼠各25只随机分成五组，I组(空白组)：未做处理，直接行豚鼠到大鼠心脏移植。II组(CVF组)：术前24小时受体腹腔注射中华眼镜蛇毒因子(CVF)40u/kg，手术前下腔静脉注射CVF 60u/kg。Ⅲ组(CVF+豚鼠正常脾淋巴细胞)：术前一周输注豚鼠正常脾淋巴细胞，心脏移植术前24小时腹腔注射CVF40U/kg，行大鼠腹部异种异位豚鼠心脏移植，术中静脉注射CVF 60U/kg;Ⅳ组(CVF+豚鼠脾坏死淋巴细胞)：术前一周输注豚鼠脾坏死淋巴细胞，心脏移植术前24小时腹腔注射CVF 40U/kg，行大鼠腹部异种异位豚鼠心脏移植，术中静脉注射CVF 60U/kg；V组(CVF+豚鼠凋亡脾淋巴细胞)：术前一周输注豚鼠凋亡脾淋巴细胞，心脏移植术前24小时腹腔注射CVF 40U/kg，术中静脉注射CVF 60U/kg；观测指标：移植心脏的存活时间、组织病理学改变。 结果：(1)凋亡脾淋巴细胞大鼠外周血CD4+CD25+调节性T细胞数量第三天即开始升高，至第七天达到最高值，至第十五天又降至正常水平。(2)供受体异种混合淋巴细胞反应(MLR)，刺激效应分别为：凋亡细胞组：380.1±10.10，正常细胞组：590.0±12.71，坏死细胞组：615.7±49.52，凋亡细胞输注组明显低于正常细胞组和坏死细胞组，P<0.05；正常细胞组和坏死细胞组刺激效应无明显差异，P>0.05。(3)IL-10、TGF-β1，Ⅰ组、Ⅲ组和Ⅳ组OD值及浓度值之间无显著差异，P>0.05；V组与Ⅰ组、Ⅲ组和Ⅳ组相比，OD值及浓度值有明显差异，P<0.05。(4)供心平均存活时间(MST)：Ⅰ组28.0±14.20分钟，Ⅱ组325.60±50.69分钟，Ⅲ组360.8±42.47分钟，Ⅳ组317.0±33.54分钟，V组444.20±31.05分钟。V组与Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组组间比较P>0.05。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组平均存活时间延长较I组明显延长P<0.05，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组组间相比较无明显差异，P>0.05。 结论：1、静脉输注豚鼠凋亡细胞的方法，可以提高体内HL-10、TGF-β1水平，从而延长移植物存活时间。2、采用静脉输注豚鼠凋亡细胞的方法，能够升高SD大鼠体内CD4+CD25+调节性T细胞浓度，调节受体自身T细胞。3、在豚鼠到大鼠心脏移植模型中，采用静脉输注豚鼠凋亡细胞的方法，联合使用CVF可以延长移植物存活时间，但不能完全克服急性血管性排斥反应(AVR)的发生。

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综述 调节性T细胞亚群在移植免疫耐受中的作用

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