结核分枝杆菌培养滤液蛋白32的克隆表达及血清学诊断应用

摘要

目的： 构建结核分枝杆菌培养滤液蛋白32(culture filtrate protein 32，CFP32)的重组质粒，在大肠杆菌中表达并纯化重组CFP32，探讨其在结核病血清学诊断中的应用价值。 方法： PCR扩增 cfp32基因片段，将其克隆到pET-21a表达载体。优化表达条件，Ni-NTA亲和层析方法纯化重组CFP32蛋白。建立检测CFP32抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法，并用于检测160例临床血清标本中的CFP32抗体。 结果： 克隆了cfp32基因，构建了表达质粒pET21a-CFP32，IPTG诱导在大肠杆菌中得到高表达CFP32蛋白包涵体，SDS-PAGE电泳在30 KD处得到条带，纯化得到高纯度CFP32蛋白，PBS复性后测得蛋白含量为3.46 mg/mL。建立并优化了CFP32检测结核抗体的ELISA方法。97例临床确诊的肺结核患者中62例CFP32抗体阳性，敏感性为63.9％；25例非结核病患者和38例健康人血清CFP32抗体阳性2例，特异性为96.8％。 结论： 成功在大肠杆菌中获得高效表达CFP32蛋白，血清抗体检测表明重组的CFP32蛋白有希望成为结核病血清学诊断的有效候选蛋白之一。

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文摘

英文文摘

论文说明:缩略语表

声明

引言

第一部分结核分枝杆菌CFP32蛋白克隆、表达和纯化

材料和方法

结果

讨论

第二部分血清抗体检测

材料和方法

结果

讨论

小结

参考文献

综述:结核分枝杆菌分泌蛋白及其在实验室诊断研究进展

附录

攻读学位期间发表文章

致谢