rAAV2介导的靶向HIF-2α的siRNA增强胰腺癌细胞对健择敏感性的实验研究

摘要

目的：观察携带靶向HIF-2α基因的shRNA的2型重组腺相关病毒对体外培养的人胰腺癌细胞增殖、凋亡作用及其对化疗药物健择的增敏作用。 方法：将rAAV2-EGFP-U6- HIF-2α-siRNA转染入人胰腺癌细胞株PANC-1中，以绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因，用荧光显微镜仪和流式细胞观察病毒转染效率。分别在常氧和缺氧条件下培养细胞，用逆转录聚合酶连反应、免疫细胞化学法检测PANC-1细胞HIF-2α mRNA和蛋白表达，MTT法检测不同浓度的化疗药物健择对PANC-1细胞的增殖抑制作用，MTT法检测缺氧条件下rAAV2-EGFP- U6-HIF-2α-siRNA联合化疗药物健择对PANC-1细胞增殖能力的影响，Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡。 结果：rAAV2-EGFP-U6-HIF-2α-siRNA被成功地转染入PANC-1细胞中，FCM测定转染效率在40％左右。与阴性对照组和空白对照组比较，实验组PANC-1细胞的HIF-2α mRNA和蛋白的表达明显受到抑制。不同浓度的健择(0.25μ g/mL-4μ g/mL)作用48小时后均对细胞增殖有抑制作用，并随剂量的增加抑制率逐渐增大(F=859.054，P<0.05)，相同药物浓度下，常氧下的细胞抑制率大于缺氧条件下的细胞抑制率(F=219.471，P<0.05)。在缺氧状态下，联合组对PANC-1细胞的生长抑制率显著高于单纯转染组和单用健择组，差异均有统计学意义(F=39.279，P<0.05)，且联合组PANC-1细胞凋亡率最高(P<0.05)。 结论：rAAV2-EGFP-U6-HIF-2α-siRNA转染PANC-1细胞后能降低PANC-1细胞株HIF-2α mRNA及蛋白的表达，抑制PANC-1细胞株增殖，促进细胞凋亡并能提高PANC-1细胞株对化疗药物健择的敏感性。

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参考文献

综述 RNAi技术在胰腺癌研究中的应用

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