哮喘小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素及其受体的表达以及布地奈德、卡介苗干预的影响

摘要

目的： 观察哮喘小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)及其受体(TSLPR)的表达以及布地奈德混悬液(BUD)、卡介苗(BCG)干预对其表达的影响，探讨TSLP、TSLPR与哮喘的关系，为哮喘的防治提供新的思路。 方法： 1.40只雌性昆明小鼠随机分成4组：哮喘组、BUD干预组、BCG干预组、正常对照组，每组10只。 2.哮喘组：昆明小鼠于第1、7、14天分别腹腔内注射0.01％OVA和10％氢氧化铝混悬液0.2ml进行致敏，第21天起，雾化吸入2％OVA生理盐水溶液5ml进行激发，每天1次，每次30分钟，连续7天。 3.BUD干预组：致敏和激发方法同哮喘组，在雾化吸入OVA前1h予以BUD生理盐水溶液5ml(含BUD1mg)雾化吸入20～30min。 4.BCG干预组：致敏和激发方法同哮喘组，于OVA致敏前Sd、3d、1d分别以BCG0.025mg皮内注射干预。 5.正常对照组：昆明小鼠以生理盐水代替OVA致敏、激发。 6.末次激发24h后收集肺泡灌洗液(BALF)、外周血、肺组织及脾组织。肺组织切片行HE染色观察病理改变，并用免疫组织化学方法判断肺组织TSLP、TSLPR的表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定BALF中IL-4、肺组织和脾组织中TSLP和TSLPR以及血清TSLP的表达。实时荧光定量PCR法检测肺组织中TSLPmRNA和TSLPRmRNA的表达。 结果： 1.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠肺组织TSLP阳性细胞的平均光密度分别为(0.277±0.009)、(0.064±0.015)、(0.160±0.009)、(0.004±0.001)。四组间存在显著差异(P<0.01)。哮喘组明显高于正常对照组(P<0.01)；BUD干预组和BCG干预组明显低于哮喘组(P<0.01)；BUD干预组和BCG干预组明显高于正常组(P<0.01)；BUD干预组明显低于BCG干预组(P<0.01)。 2.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠肺组织TSLPR阳性细胞的的平均光密度分别为(0.413±0.030)、(0.040±0.004)、(0.168±0.008)、(0.006±0.001)。结果与肺组织TSLP阳性细胞的平均光密度比较结果相似。 3.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠BALF中IL-4的表达水平分别为(244.200±4.601)pg/ml、(220.600±3.034)pg/ml、(224.900±2.930)pg/ml、(219.200±2.480)pg/ml。四组间存在显著差异(P<0.01)。哮喘组明显高于正常对照组(P<0.01)；BUD干预组和BCG干预组明显低于哮喘组(P<0.01)；BUD干预组和BCG干预组虽高于正常对照组，但差别无统计学意义(P>0.05)；BUD干预组与BCG干预组比较，差别无统计学意义(P>0.05)。 4.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠肺组织TSLP的表达水平分别为(4.221±0.115)ng/ml、(3.899±0.071)ng/ml、(3.8980±0.046)ng/ml、(3.621±0.129)ng/ml。结果与BALF中IL-4比较结果相似。 5.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠肺组织TSLPR的表达水平分别为(17.160±0.157)ng/ml、(16.460±0.209)ng/ml、(15.740±0.273)ng/ml、(15.860±0.285)ng/ml。结果与BALF中IL-4比较结果相似。 6.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠脾组织TSLP的表达水平分别为(5.467±0.074)ng/ml、(5.096±0.077)ng/ml、(5.101±0.161)g/ml、(4.975±0.073)ng/ml。结果与BALF中IL-4比较结果相似。 7.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠脾组织TSLPR的表达水平分别为(20.901±0.421)ng/ml、(18.280±0.159)ng/ml、(18.840±0.273)ng/ml、(17.930±0.156)ng/ml。四组间存在显著差异(P<0.01)。BCG干预组明显高于正常对照组(P<0.05)。其余结果与BALF中IL-4比较结果相似。 8.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠血清TSLP的表达水平分别为(1.611±0.204)ng/ml、(0.484±0.061)ng/ml、(0.166±0.045)ng/ml、(0.336±0.076)ng/ml。四组间存在显著差异(P<0.01)。哮喘组明显高于正常对照组(P<0.01)；BUD干预组和BCG干预组明显低于哮喘组(P<0.01)；BUD干预组和BCG干预组与正常对照组比较，差别无统计学意义(P>0.05)；BUD干预组明显高于BCG干预组(P<0.01)。 9.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠肺组织TSLPmRNA的相对表达水平分别为(8.510±1.657)％、(1.756±0.518)％、(3.950±1.031)％、(0.999±0.204)％。结果与BALF中IL-4比较结果相似。 10.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠肺组织TSLPRmRNA的相对表达水平分别为(8.601±1.847)％、(0.972±0.295)％、(3.236±0.538)％、(1.848±0.394)％。四组间存在显著差异(P<0.01)。BUD干预组明显低于BCG干预组(P<0.01)。其余结果与BALF中IL-4比较结果相似。 结论： 1.哮喘小鼠血清TSLP、肺组织和脾组织TSLP、TSLPR及肺组织TSLPmRNA、TSLPRmRNA的表达均增高。TSLP、TSLPR在哮喘的发病机制中起重要作用。 2.BUD、BCG可明显抑制哮喘小鼠TSLP和TSLPR的表达，为BUD、BCG防治哮喘提供了新的理论依据。 3.TSLP、TSLPR在哮喘的发生发展中起重要作用，可能成为治疗哮喘的潜在靶点。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

前 言

材料与方法

一、实验材料

二、实验方法

结 果

一、各组小鼠一般情况及症状观察

二、各组小鼠肺组织病理变化

三、各组小鼠BALF中IL-4的表达

四、各组小鼠肺组织免疫组织化学染色TSLP、TSLPR阳性细胞的表达

五、各组小鼠肺组织TSLP、TSLPR的表达

六、各组小鼠脾组织TSLP、TSLPR的表达

七、各组小鼠血清TSLP的表达

八、各组小鼠肺组织TSLP mRNA、TSLPR mRNA的表达

讨 论

参考文献

结 论

综 述 胸腺基质淋巴细胞生成素与支气管哮喘

攻读学位期间公开发表的论文

致谢