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【6h】

突变亨廷顿蛋白表达对CRE介导的基因转录的影响

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前 言

第一部分稳定表达pGL4[luc2P/CRE/Hygro]质粒的PC12细胞的构建

引 言

材料与方法

结 果

小 结

第二部分HttN端片段对CRE介导的基因转录的影响

引 言

第一节Htt-552片段和Htt-171片段在PCI2-CRE细胞中的表达

材料与方法

结 果

小 结

第二节Htt N端片段表达与CBP之间的关系

材料与方法

结 果

小 结

第三节Htt N端片段对CRE介导的基因转录的影响

材料与方法

结 果

小 结

第四节应激情况下Htt N端片段对CRE介导的基因转录的影响

材料与方法

结 果

小 结

第三部分突变亨廷顿蛋白表达对BDNF的影响

引 言

材料与方法

结 果

小 结

讨 论

结论

参考文献

攻读硕士学位期间发表文章

综述 神经系统退行性疾病中铁代谢异常的研究进展

致 谢

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摘要

本文目的:研究亨廷顿蛋白(Hungting,Htt)氨基末端片段-Htt-552片段和Htt-171片段对CRE介导的基因转录的影响,评估该基因转录调节通路在亨廷顿舞蹈病致病机制中的作用。 方法:采用脂质体转染的方法将pGL4[luc2P/CRE/Hygro]荧光素酶基因报告质粒转染到PCl2细胞中,经过潮霉素筛选后得到稳定表达该质粒的PCl2细胞(简称为PCl2-CRE)。用腺病毒介导野生型与突变型Htt-552片段和Htt-171片段感染的方法制作亨廷顿舞蹈病的PCl2-CRE细胞模型。利用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测其荧光值,观察突变型Htt-552片段和Htt-171片段在正常情况下以及细胞应激情况下对CRE介导的基因转录的影响。用Real-time PCR的方法检测Htt-552片段和Htt-171片段对BDNF mRNA表达的影响。 结论:突变型Htt-552片段和Htt-171片段无论是在正常情况或某些细胞应激情况下对cAMP反应元件相关性转录均无影响。突变型Htt-552片段和Htt-171片段降低了BDNF的表达。

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