GFP-亨廷顿蛋白表达质粒的构建、在哺乳动物细胞中的表达及对溶酶体酶的影响

摘要

目的：构建GFP-亨廷顿蛋白表达质粒，观察所构建质粒在哺乳动物细胞中的表达，研究外源性亨廷顿蛋白对细胞溶酶体酶的影响。 方法：构建GFP一亨廷顿蛋白表达质粒：pcDNA3-GFP-Htt969．18(代表野生型亨廷顿蛋白N端969个氨基酸，含18个谷氨酰胺)和pcDNA3-GFP-Htt969-100(代表突变型亨廷顿蛋白N端969个氨基酸，含100个谷氨酰胺)；采用脂质体转染法转染质粒：应用Wbstemblot、免疫荧光法观察蛋白表达；采用免疫荧光法观察外源性亨廷顿蛋白过表达对细胞溶酶体酶CathcpsinB、D的影响。 结果：经限制性内切酶酶切、聚合酶链式反应和测序证明质粒构建成功，并且亨廷顿蛋白表达质粒可以在哺乳动物细胞表达：质粒转染后亨廷顿蛋白过表达可显著增加溶酶体酶CathepsinB、D水平。 结论：外源性亨廷顿蛋白显著增加溶酶体酶CathepsinB、D水平，提示自噬／溶酶体途径参与了亨廷顿蛋白的加工处理。

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前言

第一部分GFP-亨廷顿蛋白表达载体的构建及其在哺乳动物细胞中的表达

第二部分 亨廷顿蛋白的表达对溶酶体酶Cathepsin B和D的影响

参考文献

攻读学位期间发表的论文

附录

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致谢