硫酸镁对放射性脑损伤大鼠海马齿状回神经增殖及学习记忆能力的影响

摘要

目的：探讨成年大鼠放射性脑损伤后，硫酸镁(magnesium sulfate，MgSO4)对海马齿状回(dentate gyrus，DG)的神经保护作用及与学习记忆能力的关系。 方法：本实验将健康成年SD大鼠(Sprague Dawley rat)随机分为实验组(硫酸镁+照射)、实验对照组(生理盐水+照射)和空白对照组(生理盐水+假照射)。用5MeV电子线20Gy全脑单次垂直照射建立大鼠放射性脑损伤模型。用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine，BrdU)于照射后连续三天标记增殖的细胞，免疫组织化学检测BrdU阳性细胞，采用体视学的计算方法计算DG的BrdU阳性细胞总数。经Y-迷宫测试筛选出SD大鼠于照射前1d、前30 min、照射后即刻及照射后连续5天分别给予10％MgSO4(400 mg·kg-1)缓慢腹腔注射，每天一次。在照射后7d、14d、28d连续3d进行Y迷宫训练，Y迷宫训练结束后，进一步检测BrdU阳性细胞，用Y迷宫训练成绩的优劣评定硫酸镁与大鼠学习记忆能力的关系及对放射性脑损伤大鼠脑功能的神经保护作用。SD大鼠于照射前1d、前30 min及照射后即刻给予10％MgSO4(400 mg·kg-1)缓慢腹腔注射，照射后2小时用免疫组织荧光法检测海马巢蛋白(neuroepthelial stem cell protein, Nestin)的表达。 结果： 1.空白对照组大鼠DG区内可见少量的BrdU阳性细胞；实验对照组大鼠DG区内的BrdU阳性细胞数明显增加，有显著差异(P＜0.05)。 2.空白对照组大鼠在各时间点的Y迷宫成绩大致相同，组间无统计学意义。实验对照组各时间组大鼠的Y迷宫成绩，均较空白对照组动物下降，有显著差异(P＜0.05)；而硫酸镁干预后，实验28d组的学习记忆成绩较7d、14d组明显提高，较未用药的实验对照组也明显提高，有显著差异(P＜0.05)。Y迷宫训练结束后，对BrdU免疫细胞化学结果进一步分析，实验对照组动物BrdU阳性细胞数均比空白对照组相同时间点动物细胞数多，有显著差异(P＜0.05)；随着时间的推移，BrdU阳性细胞数也逐渐减少，实验对照7d组动物BrdU阳性细胞数较14d、28d组动物细胞数多，有显著差异(P<0.05)；而硫酸镁干预后，各时间组动物BrdU阳性细胞数均比实验对照组同一时间点动物细胞数少，有显著差异(P<0.05)。 3.实验对照组大鼠海马Nestin阳性细胞数较空白对照组明显增多，以海马结构齿状回增多最为显著，有显著差异(P<0.05)；而实验组海马Nestin阳性细胞数较实验对照组明显减少，有显著差异(P<0.05)。 结论： 1.成年大鼠放射性脑损伤后可增强DG区的神经发生，出现细胞增殖。 2.MgSO4能促进、改善放射性脑损伤大鼠学习记忆能力的恢复，明显减少放射性脑损伤后DG区的神经细胞的增殖，具有良好的神经保护作用。 3.MgSO4对放射性脑损伤后引起的海马巢蛋白的表达有明显的抑制作用，能明显改善脑损伤后神经细胞能量代谢、促进神经功能的恢复。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

1引言

2实验材料与方法

2.1实验材料

2.1.1实验动物

2.1.2主要试剂

2.1.3设备仪器

2.2实验方法

2.2.1实验设计

2.2.2溶液配制：

2.2.3照射方法及剂量确认

2.2.4组织切片制备

2.2.5免疫荧光组织化学检测

2.2.6BrdU标记

2.2.7免疫组织化学染色

2.2.8学习记忆能力的测定——Y迷宫操作方法

2.2.9数据处理及统计

3结果

3.1.放射性脑损伤对成年大鼠海马齿状回细胞增殖的影响

3.1.1一般情况

3.1.2放射性脑损伤后海马齿状回的细胞增殖

3.2.硫酸镁对放射性脑损伤大鼠学习记忆能力的影响

3.2.1Y-迷宫测试—学习记忆成绩

3.2.2大鼠海马齿状回BrdU阳性细胞表达情况

3.3硫酸镁对放射性脑损伤大鼠海马结构巢蛋白表达的影响

4讨论

4.1放射性脑损伤对成年大鼠海马齿状回细胞增殖的影响

4.2硫酸镁对放射性脑损伤大鼠学习记忆能力的影响

4.3硫酸镁对放射性脑损伤大鼠海马结构巢蛋白表达的影响

5结论

参考文献

附录 在攻读学位期间本人公开发表的论文

综述：巢蛋白的功能及脑损伤后的变化

致谢