热休克凋亡胶质瘤细胞负载树突状细胞肿瘤疫苗的制备及其临床试验性运用

摘要

脑恶性胶质瘤是中枢神经系统（central nervous system CNS）原发性恶性肿瘤中最常见的肿瘤。其手术难以全切，术后易复发，对化疗和放疗仅为中度敏感，因此，目前现有的国际公认的规范化序贯治疗方案“手术+放疗+化疗”难以根治脑恶性胶质瘤。
　　 生物免疫治疗主要是利用生物工程的方法，调动患者自身免疫机制，利用抗体、细胞因子治疗，过继免疫治疗及基因治疗等手段来提高疗效，抑制肿瘤复发，提高患者的生活质量，是继手术、放化疗后的第四种治疗模式。与前三种传统治疗技术相比，生物免疫治疗有安全、有效及低毒副作用的优势。
　　 本课题采用热休克技术，将人脑胶质瘤细胞致敏人外周血来源的DCs，制备肿瘤细胞疫苗，观察其体外的生物学作用；在此基础上将术中病理证实为胶质母细胞瘤标本，经热休克诱导肿瘤细胞凋亡，负载患者自体外周血来源DCs，制备肿瘤细胞疫苗，输注淋巴结，观察其临床有效性和安全性。
　　 第一部分热休克诱导凋亡的脑胶质瘤细胞负载树突状细胞及其激发T细胞的体外试验。
　　 目的：制备热休克诱导凋亡的脑胶质瘤细胞负载树突状细胞（dendrie cell DC），探讨其激发T细胞的作用。
　　 方法：诱导正常人外周血来源未成熟DC，负载热休克诱导凋亡的脑胶质瘤细胞的DC，通过双荧光标记法流式检测DC表型、MTT。法测定CTL活性。
　　 结果：负载热休克脑胶质瘤细胞的DC具有良好的激活CTL作用及对胶质瘤的杀伤效应也显著高于负载冻融裂解脑胶质瘤细胞制备的DC，差异有统计学意义（P<0.05），而且杀伤活性随着效靶比而增加。
　　 结论：负载热休克脑胶质瘤细胞的树突状细胞有良好的激发CTL杀伤肿瘤的作用，是一种具有潜在临床运用价值的肿瘤疫苗。
　　 第二部分负载热休克脑胶质瘤细胞的自体树突状细胞疫苗的临床试验。
　　 目的：通过采集患者胶质母细胞瘤手术标本，经过热休克诱导肿瘤细胞凋亡，负载患者自体外周血来源DCs，制备人脑胶质瘤DC疫苗及其临床疗效的评价。
　　 方法：通过采集患者胶质母细胞手术标本，采用热休克诱导肿瘤细胞凋亡，制备自体人脑胶质瘤DC疫苗。遵循临床试验管理规范，经按院伦理委员会批准的临床试用方案，设立DC治疗组和对照组，对照组采用传统的手术及术后放化疗方法，DC治疗组在传统治疗基础上，通过自体来源的DC疫苗，联合术后放化疗，比较观察两组患者的免疫功能、肿瘤的局控率、患者的生存时间、Karnofsky，评分和并发症情况，探讨DC疫苗治疗脑胶质瘤母细胞的安全性及有效性。
　　 结果：通过临床治疗和随访调查DC治疗组的患者免疫功能指标，肿瘤局控率生存时间和Karnofsky评分优于对照组。
　　 结论：脑胶质瘤患者的自体DC疫苗联合术后放化疗具有一定体内抗肿瘤作用，初步临床试用表明该疫苗有良好的安全性，为脑胶质母细胞瘤提供一种更有效的治疗方法。