全胃肠外营养对大鼠肠道TLRS表达的影响

摘要

目的：全胃肠外营养可导致肠粘膜萎缩，肠道免疫屏障损害，肠道细菌移位，增加感染的发病率，甚至导致肠源性脓毒血症，但至今全胃肠外营养导致肠道屏障功能障碍的病因及病理生理机制仍不明确。近年来，固有性免疫在抵御病原体入侵中的作用越来越受到重视，Toll样受体（TLRs）作为固有免疫模式识别受体中最重要的成员之一，在固有免疫中起着决定性作用并最终激活适应性免疫，而目前国内及国外报道有关全胃肠外营养导致TLRs表达改变的文献不多。本课题即利用RT-PCR技术，检测TPN后肠道Toll样受体表达的变化，探讨其在TPN相关肠道粘膜免疫损害中的作用，应用ω-3鱼油脂肪乳干预，观察其改善肠道粘膜屏障的作用，为临床预防和治疗TPN相关并发症提供实验室依据。
　　 材料与方法：选择18只SPF级雄性SD大鼠随机分为3组，分别为生理盐水组，TPN组，鱼油组。商品化鼠粮喂养，自来水龙头供水，维持12：12小时昼夜循环，温度维持在22℃左右，相对湿度40％～60％。各组大鼠麻醉成功后，无菌环境下经右颈静脉置入硅胶管后予进食进水两天以利于从手术应激中恢复。第3天起即通过恒流微泵持续输液一周：生理盐水组予输注生理盐水，同时进食进水；TPN组予输注TPN（配方组成详见表1）；鱼油组TPN中脂肪乳更换为ω-3鱼油脂肪乳注射液，TPN组及鱼油组大鼠输液期间禁食禁水。各组输液量均为第1天20ml，第2天40ml，第3～7天为60ml。经上述处理后，所有大鼠颈椎脱臼法快速处死取小肠近端1/3，中间段1/3及远端1/3组织，用RT-PCR方法检测所取小肠组织中TLR2，3，4，5，7，9的表达水平.
　　 结果：PCR结果显示TLR2，3，4，5，7，9在大鼠近端，中间段及远端小肠组织中均有表达，全胃肠外营养后大鼠近端及中间段小肠组织TLRs4，5，7，9表达水平显著上调，远端小肠组织TLRs2，3，4，5，7，9表达水平均显著上调；而鱼油组近端及中间段小肠组织TLRs4，5，7，9表达水平较TPN组显著下调，鱼油组远端小肠组织TLRs2，3，4，5，7，9表达水平较TPN组均显著下调。
　　 结论：全胃肠外营养及缺乏肠内营养大鼠肠道TLRs表达水平上调，这种改变可能导致菌群移位，增加感染性脓毒血症的风险性，而鱼油作为特定的免疫营养素对全胃肠外营养后肠道粘膜免疫功能的损伤具有一定的保护作用。