血管生成素-1对油酸致小鼠肺损伤早期的保护作用及机制研究

摘要

目的:观察血管生成素-1（angiopoietin-1，Ang-1）对油酸导致的小鼠肺损伤（acute lunginiury，ALI）早期的保护性作用及其对紧密连接相关ZO-1（zonula occludens-1）蛋白和VE-钙粘蛋白（VE-cadherin）的调节作用，并初步探讨其机制。
　　 方法:将140只雌性BALB/c小鼠随机分为7组，每组20只。肺损伤组（A组）：从小鼠尾静脉注射油酸（0.2 ml/kg）制备肺损伤动物模型，4小时后腹腔注射等量生理盐水；肺损伤+Ang-1组（B组）：建立肺损伤模型后4小时，腹腔注射血管生成素-1（312.5μg/kg）；肺损伤+Ang-1+LY294002组（C组）：建立肺损伤模型后4小时，腹腔注射血管生成素-1（312.5μg/kg），同时经腹腔注射PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002干预（100 mg/kg）；肺损伤+LY294002组（D组）：建立肺损伤模型后4小时，腹腔注射等量生理盐水，同时注射LY294002（100 mg/kg）；正常对照组（E组）：经过尾静脉注射等量生理盐水，4小时后再经腹腔注射等量生理盐水；正常对照+LY294002组（F组）：经过尾静脉注射等量生理盐水，4小时后经腹腔注射LY294002（100 mg/Kg）；正常对照+Ang-1组（G组）：经过尾静脉注射等量生理盐水，4小时后经腹腔注射血管生成素-1（312.5μg/kg）。8小时后每组随机抽取半数小鼠断颈法处死，后进行肺泡灌洗；另一半处死后，右肺进行湿/干重检测，左肺留取标本检测。分别测定肺湿/干重比、肺泡灌洗液总细胞计数、中性细胞计数、蛋白含量变化；逆转录聚合酶链反应（Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）法、蛋白印迹法（western blot）及免疫组化法测定肺组织中ZO-1、VE-cadherin的表达；光镜观察并盲法评分比较肺组织病理学改变。
　　 结果:B组肺湿/干重比、肺泡灌沈液总细胞计数、中性细胞计数、蛋白含量及肺损伤评分分别为（4.02±0.24）、（33.84±2.56）×104/L、（19.78±1.64）×103/L、（162.84±17.26）μg/ml、（1.73±0.14），与A组[（5.29±0.20）、（42.84±3.67）×104/L、（26.11±2.49）×103/L、（227.98±13.06）μg/ml、（3.42±0.11）]及C组[（5.09±0.19）、（40.18±1.79）×104/L、（23.80±1.38）×103/L、（211.96±19.10）μg/ml、（3.20±O.22）]比较均有下降，差异具有统计学意义（p＜0.05），而B组ZO-1、VE-cadherin的mRNA水平及蛋白表达水平均高于A组及C组，差异具有统计学意义（p<0.05）；C组肺湿/干重比、肺泡灌洗液中性细胞计数、蛋白含量及肺损伤评分低于A组，差异具有统计学意义（p<0.05），但是灌洗液总细胞计数、ZO-1、VE-cadherin的mRNA水平及蛋白表达水平A组、C组之间不存在显著差异（p＞0.05）；B组肺湿/干重比、肺泡灌洗液总细胞计数、中性细胞计数、蛋白含量及肺损伤评分显著高于E组，两种蛋白mRNA水平及蛋白表达水平低于E组（P<0.05）：A组与D组之间以及E组、F组、G组三组之间比较各指标差异不具有统计学意义（p>0.05）。
　　 结论:血管生成素-1减轻了油酸诱导的急性肺损伤小鼠早期的肺部渗出和炎症细胞浸润，阻止了肺损伤早期紧密连接相关ZO-1、VE-cadherin蛋白表达量的降低，其调节作用可以被LY294002抑制。本研究提示：Ang-1可能通过PI3K/Akt途径调节紧密连接相关ZO-1、VE-cadherin蛋白表达，进而对油酸诱导的小鼠早期急性肺损伤产生保护性作用。