借助立体定位术和荧光界定GFP裸小鼠脑解剖结构

摘要

目的：借助立体定位术和荧光来界定GFP裸小鼠的脑解剖结构。
　　 方法：对GFP裸小鼠脑分别进行冠状位、矢状位和水平位的冰冻切片，经荧光成像后行尼氏染色做对比观察，结合Paxinos编著的小鼠脑图谱对荧光图像内的解剖结构进行辨认分析。通过立体定位仪定位10只成年GFP裸小鼠的前囟和人字点所在的脑冠状切面，然后进行冰冻切片，比较小鼠个体间以及与小鼠脑图谱间的解剖结构差异。利用小鼠脑切片模具分别对10个离体鼠脑进行冠状位和矢状位上的切片，再进行冰冻切片，荧光镜下观察，比较个体间差异，并对离体鼠脑结构进行定位。
　　 结果：GFP鼠脑的不同结构间存在着荧光色差，借此可辨认出鼠脑的解剖结构：细胞核、尼氏小体密集区及神经纤维分布区为弱荧光信号，细胞核、尼氏小体密集区周围结构，如嗅球的丛状层、小脑的分子层为强荧光信号。切片经尼氏染色后，荧光强度明显减弱，体视显微镜下观察到的脑结构与荧光镜观察的结果基本一致，参照小鼠脑图谱可对荧光图像上的解剖结构进行辨认。对在体鼠脑的立体定位研究发现GFP小鼠间的前囟、人字点处的冠状切面结构无差异，但前囟处的冠状切面结构与图谱中前囟处的冠状切面结构不同。对离体鼠脑的立体定位研究并未发现个体间的脑切片有差异性，利用小鼠切片模具可进行离体鼠脑的解剖结构定位，准确快捷地获得兴趣位点。
　　 结论：借助立体定位术和荧光界定GFP裸小鼠的脑解剖结构可做为一个实验平台应用于目前广为开展的荧光示踪实验的解剖定位研究。

目录

声明

引言

1、实验动物和器材

1.1 实验动物:表达绿色荧光蛋白的裸小鼠C57BL/6J-NC-GFP由本实验室繁育[1](图1)

1.2 实验器械:

1.3 实验材料:

2、实验方法

2.1 利用前囟和人字点定位在体脑内结构

2.2 剥离鼠脑

2.3 利用SLY小鼠脑切片模具定位离体脑内结构

2.4 处理样品托:

2.5 制作冰冻切片:

2.6 荧光成像:

2.7 尼氏体染色:

3、结果

3.1 荧光图像与尼氏染色图像的对比(图10-12)

3.2 定位在体鼠脑解剖结构的结果

3.3 定位离体鼠脑解剖结构的结果

4、讨论

4.1 在体鼠脑解剖结构的定位

4.2 离体鼠脑解剖结构的定位

4.3 利用荧光界定GFP鼠脑结构的可行性

4.4 立体定位术和荧光界定解剖结构的应用

研究小结

参考文献

综述

中英文缩略词表

攻读硕士学位期间撰写的论文

致谢