E64D对缺氧缺血性脑损伤后海马中凋亡、自噬、坏死三种蛋白分子表达的影响

摘要

目的：通过凋亡-自噬-坏死途径探讨缺氧缺血对新生大鼠海马神经元的损伤，以及外源性E64D对脑损伤可能的保护作用。
　　 方法：7日龄新生大鼠分三组：假手术组(A组)：仅分离出左侧颈总动脉，不予结扎，不予低氧处理，与C组同时腹腔注射同等体积的1％DMSO溶液。HIBD模型组(B组)：予以结扎左侧颈总动脉和低氧处理，与C组同时腹腔注射同等体积的l％DMSO。E64D治疗组（C组）：HIBD建模后1小时每只SD大鼠给予腹腔注射E64D，剂量lOug/0.1ml。
　　 1．应用免疫印迹法（WesternBlot，WB）检测新生大鼠海马中Activedcaspase-3、Beclin-1、SpectrinαⅡ(C-3)降解产物三种蛋白分子在0h、2h、6h、12h、24h、48h的表达变化。2．在48h取大脑组织，利用干湿比重法检测大脑的含水量。3．光镜下观察各组大鼠左侧脑组织HE染色的病理变化。
　　 结果：1．HIBD模型组中Activedcaspase-3蛋白在建模后12h开始明显表达，至24h达到高峰，随后逐渐降低。12h、24h、48h蛋白水平较假手术组表达升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。E64D治疗组中蛋白水平下降仅在24h的时候与模型组差异有统计学意义(P＜0.05)。2．HIBD模型组中Beclin-1蛋白在建模后6h开始明显表达，至12h达到高峰，随后逐渐降低。各时间点蛋白表达水平较假手术组升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。E64D治疗组6h、12h、24h、48h的蛋白表达水平较模型组下降，差异有统计学意义(P＜0.05)。3、HIBD模型组中SpectrinaⅡ降解产物在模型建立后2h即开始增高，持续升高至48小时。各时间点蛋白表达水平较假手术组升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。E64D治疗组2h、6h、12h的蛋白表达水平较模型组下降，差异有统计学意义(P＜0.05)。4．HIBD模型组左侧大脑含水量较假手术组增加，有显著统计学差异(P＜0.01)；E64D治疗组与HIBD模型组左侧大脑含水量差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 结论：1．缺氧缺血刺激海马神经元细胞自噬、凋亡、坏死发生增强；2．E64D抑制细胞凋亡、自噬和坏死，相关蛋白表达下降，减轻缺氧缺血造成的神经细胞死亡。3．缺氧缺血后左侧大脑含水量明显增加，出现脑水肿；4．应用蛋白酶抑制剂E64D没有减轻脑水肿的作用。

目录

声明

序言

材料与方法

1.1 实验动物

1.2 动物分组及处理

1.3 新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型的建立

1.4 标本的采集及预处理

1.5 所用试剂和设备

1.6 实验过程

1.7 统计学分析

结果

2.1 HIBD模型建立前后观察情况

2.2 三种蛋白的Western Blot实验结果

2.3 干湿比重法的实验结果

2.4 HE染色的实验结果

讨论

3.1 选择新生大鼠的海马作为研究对象的原因

3.2 E64D对凋亡、自噬和坏死的影响

3.3 脑水肿是缺氧缺血脑损伤的重要病理改变

结论

参考文献

综述

缩略词表

攻读学位期间公开发表的论文

致谢