结核患者血清IgG抗体适体的制备及其检测血清结核抗体的研究

摘要

目的：筛选获得结核患者血清IgG抗体的特异性适体，研究结核患者IgG抗体适体组合及适体与抗原组合在结核病血清学检测中的应用价值。
　　 方法：纯化结核患者血清中的IgG抗体，以IgG抗体为靶标，利用SELEX技术进行筛选，筛选得到的ssDNA适体文库，进行克隆测序、亲和性检测、二级构象分析，鉴定单独适体、两适体组合及适体和抗原组合的检测效果，均进行了88份血清标本的分析，然后将适体组合与抗原初步组合进行221份血清标本的分析。
　　 结果：纯化获得了IgG抗体，浓度为1.8mg/ml。SELEX筛选12轮后，随机挑选12个适体进行二级结构分析和亲和性检测。二级构象分析揭示，适体与靶分子的结合基础为口袋颈环鼓包结构和分枝的连接角度。SELEX筛选得到4个较高亲和性适体。单适体88份血清学检测结果显示，适体之间存在交叉互补性。适体两两组合88份血清学检测效果显示，N1+N6组合的叠加作用较好且阳性平均值与阴性平均值的比值(P/N)较高。N6适体、16KD抗原以及N6+16KD（1:1比例组合）3种检测方法，88份血清标本检测的特异性均为100％，敏感性分别为：47.92%、56.25%、64.58%，非参数检验显示,3种检测体系的结核病组和健康对照组之间差异均具有统计学意义(P均＜0.05)，卡方检验三种检测方法之间差异无统计学意义(P＞0.05)。选择适体之间叠加作用较好且P/N值较高的N1+N6与16KD抗原的初步组合，221份血清标本检测结果显示了相同的结果，即卡方检验三种检测方法之间差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 结论：SELEX技术筛选获得的特异性IgG抗体适体具有良好的结核病血清学诊断价值，可用于结核病的实验室诊断，虽然适体与抗原检测存在交叉互补性，组合检测敏感性有所提高，说明适体和抗原组合这种检测方法是可行的，但是适体检测、抗原检测及适体和抗原组合检测的检测效果差异不显著。

目录

声明

引言

综述

材料和方法

1. 材料

1.1血清标本来源

1.2 主要试剂

1.3 主要仪器

2.方法

2.1 结核患者血清IgG抗体的获得及浓度测定

2.2 SELEX筛选

2.3 筛选饱和性测定

2.4 筛选得到的适体文库克隆测序分析

2.5 适体亲和性检测

2.6 ELISA 法检测血清标本

2.7 统计学分析方法

结果

1．结核患者血清IgG抗体的获得及浓度测定结果

2．SELEX筛迭结果及筛选饱和性测定结果

3．筛选得到的适体文库克隆测序分析及亲和性检测结果

4．ELISA法检测血清标本结果

4.1 单个适体检测血清结果

4.2 两适体组合检测血清结果

4.3 适体和16KD抗原组合检测血清结果

4.4 两适体组合和16KD抗原组合血清结果

讨论

结论

参考文献

攻读学位期间出版或公开发表的论著、论文

中英文缩略语表

致谢