大鼠脊髓圆锥损伤后排便功能重建的初步实验研究

摘要

目的：在对大鼠排便的初级运动、感觉中枢定位的基础上，应用神经移位修复重建直肠与肛管的运动、感觉神经通路，建立大鼠脊髓圆锥损伤后直肠-肛管生理反射弧重建排便功能动物模型，并观测该生理反射通路重建排便功能的修复效果，从而为临床脊髓损伤（spinal cord injury, SCI）患者神经性大肠（neuropathic bowel）功能重建提供新的修复思路。
　　方法：①大鼠脊髓圆锥损伤后排便生理反射弧重建排便功能动物模型的建立：先建立大鼠脊髓圆锥损伤动物模型，再建立真正生理意义上的人工排便反射通路；选取20只体重280~300g的成年雌性SD大鼠，随机分为2组，每组10只。先对A组、B组动物做L2~S4平面椎板切开，在硬膜外用显微剪刀切断脊髓L6/S1平面，造成SD大鼠的横断性脊髓损伤，在此基础上A组为右侧L6前、后根分别与右侧S2前、后根端端吻合造模；B组为右侧L6总干与右侧S2总干端端吻合。左侧不做任何处理。术后观察大鼠排便情况及下肢活动情况，并行BBB评分。术后8周取材并对感觉、运动神经行甲苯胺蓝染色，计算感觉、运动神经有髓神经纤维通过率，并进行电生理检查。②大鼠脊髓圆锥损伤后排便功能重建的初步观察：取60只体重280~300g的成年雌性SD大鼠，随机分为5组，每组12只。均予以右侧L6前、后根分别与右侧S2前、后根端端吻合神经移位法成功建立大鼠脊髓圆锥损伤后直肠-肛管生理反射弧重建排便功能动物模型，分别于术后2W、4W、8W、12W、20W通过一般行为学观察，电生理检测，吻合口神经纤维的形态学观察，凋亡相关基因检测等，最后根据各项测量指标，分别统计各组标本所测得的数据，应用SPSS13.0软件计算平均值和标准差，分析数据，结果采用x±s表示；来探讨该生理排便反射通路的修复效果。
　　结果：①大鼠脊髓圆锥损伤后排便生理反射弧动物模型的建立：A组有3只死亡，B组有2只死亡予以剔除，术后排尿、排便与术前无明显统计学差异。A组术前、术后BBB评分为（20.50±0.25）、（18.60±0.18）分；B组为（20.32±0.25）、（18.30±0.26）分，组间差异无统计学意义（P＞0.05）。A组L6脊神经前、后根神经纤维分别为（362±24）、（538±20）根，S2脊神经前后根神经纤维分别为（336±18）、（480±22）根，B组L6、S2神经根总干的神经纤维为（878±34）、（782±28）根，组间差异均无统计学意义（P＞0.05）。L6-S2脊神经前、后根吻合口有髓纤维通过率分别为（68.86±5.62）％、（53.45±4.43）%。单向方波（3mA、0.3ms）分别刺激A组S2后根吻合口近端和B组S2神经根总干吻合口近端，均可记录到直肠/肛管神经丛动作电位，波幅分别为，（0.14±0.02）mV，（0.13±0.03） mV，差异无统计学意义（P＞0.05）。②大鼠脊髓圆锥损伤后排便功能重建的初步观察：每组大鼠均有3-4只死亡，其余的大鼠一般情况随时间延长逐渐好转；刺激各组动物实验侧S2后根吻合口近端，均可在肛管-直肠神经丛记录到动作电位，实验侧动作电位波幅逐渐增大趋于接近正常，电刺激对侧S2后根吻合口近端，未记录到动作电位，差异有统计学意义（P<0.05）。脊神经前后根吻合口甲苯胺蓝染色显示有较多的神经纤维通过，有髓神经纤维的数目明显较头端少，随修复时间延长，有增多趋势。脊髓圆锥损伤后T12～T13脊髓节段神经细胞凋亡出现，呈现高表达，随修复时间延长，有减少趋势呈低表达或阴性表达。
　　结论：①大鼠脊髓圆锥损伤后排便生理反射弧动物模型的建立：将大鼠L6前、后根分别与S2前、后根端端吻合造模，神经再生修复过程中轴突错配率较低，利于神经功能恢复；造模方式，操作简便易行、可重复性好，且能重建完整的直肠-肛管反射弧，是一种较理想的直肠-肛管生理反射弧重建的动物模型。②大鼠脊髓圆锥损伤后排便功能重建的初步观察：本实验造模方式下的结果初步观察提示，本实验模型手术方法能较好地恢复脊髓圆锥损伤SD大鼠的排便功能。

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前 言

参考文献

第一部分：大鼠脊髓圆锥损伤后排便生理反射弧动物模型的建立

1.引言

2.实验材料

3.实验方法

4.结果

5.讨论

参考文献

第二部分：大鼠脊髓圆锥损伤后排便功能重建的初步观察

前言

1.实验试剂

2.实验设备

3.实验动物

4.方法

5.结果

6.讨论

参考文献

附 录 一

附 录 二

攻读学位期间公开发表的论文

致 谢