胶质瘤细胞中GDNF基因启动子I区甲基化修饰对其基因转录的影响

摘要

目的:观察GDNF基因启动子I区在人脑胶质瘤细胞中的甲基化修饰状态，探讨胶质瘤细胞中GDNF基因启动子I区甲基化修饰的改变对其基因转录的影响。
　　 方法:基因测序检测10例胶质瘤与5例正常脑组织中GDNF基因序列，比较其基因是否有突变发生;重亚硫酸盐修饰后基因测序(BSP)检测20例胶质瘤(10例低级别和10例高级别)与5例正常脑组织中GDNF启动子I区甲基化修饰状态。在胶质瘤U251细胞系中，BSP检测不同浓度5-aza-CR干预前后GDNF基因启动子I区甲基化修饰水平，RT-PCR检测各组中GDNFmRNA的表达。
　　 结果:GDNF基因启动子I区基因在胶质瘤中没有发生突变；GDNF基因启动子I区甲基化修饰在正常脑组织、低级别、高级别中发生率分别为66.25±9.05％、86.25±8.73%、86.75±8.85%。在胶质瘤中的甲基化修饰水平比正常脑组织明显增高(P＜0.05)，而高低级别之间无显著性差异。在胶质瘤U251细胞系中，应用5-aza-CR干预后，GDNF基因启动子I区甲基化修饰水平开始下降，加入5μmol的5-aza-CR时GDNF启动子I区甲基化水平显著下调，相反GDNFmRNA表达却达到最高；力口入更高浓度的5-aza-CR时，GDNF启动子I区甲基化修饰水平不再改变，而GDNFmRNA的表达反而开始下降。
　　 结论:在胶质瘤细胞中，GDNF启动子I区发生了高甲基化修饰；5-aza-CR能够改变GDNF启动子1区的甲基化修饰状态,5-aza-CR对GDNF基因具有去甲基化作用；GDNF启动子I区去甲基化能够影响GDNF基因的转录。