mTOR信号途径在儿童再生障碍性贫血T细胞中异常活化的初步研究

摘要

目的：1.通过检测再生障碍性贫血（AA）患儿T细胞内mTOR信号途径分子的表达水平，研究该信号途径在儿童AA中的改变。2.通过检测AA患儿T细胞内调控因子GAS5的表达水平，初步探讨GAS5与mTOR信号途径的关系。3.从T细胞的胞内信号转导途径上，初步探讨儿童AA的免疫学发病机制。
　　方法：1.用流式细胞术（FCM）方法检测16例初治SAA及8例免疫抑制剂治疗（IST）有效SAA患儿外周血CD3+T细胞内mTOR信号途径分子磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化TSC2（p-TSC2）、磷酸化mTOR（p-mTOR）、磷酸化4EBP1（p-4EBP1）及磷酸化p70S6K（p-p70S6K）的表达水平。2.用实时定量聚合酶连反应（RT-PCR）方法检测23例初治SAA及7例IST有效SAA患儿骨髓CD3+T细胞内调控因子GAS5的表达水平。
　　结果：1.初治SAA组外周血CD3+T淋巴细胞内p-Akt、p-TSC2、p-mTOR、p-4EBP1及p-p70S6K表达水平均明显高于正常对照组（P＜0.05），而低于阳性对照CEM细胞株组（P＜0.05），初治SAA组、正常对照组及CEM组p-Akt的平均荧光强度（MFI）分别为（8.04±3.78）、（2.59±1.01）、（20.23±8.98），p-TSC2分别为（49.73±19.49）、（16.10±8.04）、（101.05±29.78），p-mTORC1分别为（13.90±9.32）、（2.92±1.09）、（34.3±19.03），p-4EBP1分别为（142.69±53.36）、（26.91±13.70）、（256.01±53.79）， p-p70S6K分别为（17.67±10.48）、（3.69±2.22）、（31.73±12.85）。2.SAA治疗有效组外周血CD3+T淋巴细胞内p-Akt、p-TSC2、p-mTOR、p-4EBP1及p-p70S6K的表达水平均低于初治SAA组（P＜0.05）；SAA治疗有效组p-Akt、p-TSC2、p-mTORC1、p70S6K的表达水平与正常对照组无明显差异（P均＞0.05），但p-4EBP1的表达水平高于正常对照组（P＜0.05），治疗有效组信号途径分子的表达量依次为（3.28±1.27）、（16.50±10.91）、（3.54±1.66）、（74.89±49.69）、（4.21±1.69）。3.初治SAA组骨髓CD3+T淋巴细胞内GAS5的表达量明显低于正常对照组（P＜0.05），而显著高于CEM组（P＜0.05），三组GAS5的表达量分别为（4.13±2.74）、（11.14±4.86）、（1.59±0.88）。4.治疗有效组骨髓CD3+T淋巴细胞内GAS5的表达水平高于初治SAA组（P＜0.05），而与正常对照组无明显差异（P＞0.05），表达量为（8.92±3.53）。
　　结论：1.初治SAA患儿外周血T细胞中p-Akt、p-TSC2、p-mTOR、p-4EBP1、p-p70S6K表达升高，表明mTOR信号途径在SAA患儿中呈活化状态。2.SAA治疗有效患儿外周血T细胞中p-Akt、p-TSC2、p-mTOR、p-4EBP1、p-p70S6K表达低于初治SAA患儿，mTOR信号途径的活化程度与疾病状态相关，说明该信号途径可能参与AA的T细胞的免疫异常。3.初治SAA患儿骨髓T细胞内GAS5表达水平明显低于正常儿童而显著高于CEM细胞，SAA治疗有效后GAS5表达水平明显升高，GAS5的表达水平可能与mTOR信号途径的活化存在一定负相关。GAS5可能为负性调控因子。

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