RO25-6981对大鼠蛛网膜下腔出血后认知功能影响的实验研究

摘要

第一部分：NR2B在大鼠蛛网膜下腔出血后不同脑组织中的表达研究
　　目的：建立大鼠蛛网膜下腔出血（SAH，subarachnoid hemorrhage）模型，观察N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚单位NR2B在不同脑组织中的表达变化。
　　方法：42只成年健康雄性SD大鼠，随机分为正常组、对照组、SAH后1天（Day1）、3天（Day3）、5天（Day5）、7天（Day7）、14天（Day14）共7组，每组6只大鼠。经大鼠自体尾动脉（股动脉）非肝素化动脉血注入视交叉池致蛛网膜下腔出血模型。分别在蛛网膜下腔出血后1、3、5、7、14天后处死大鼠，取大脑颞叶皮层、海马组织、小脑组织做标本，Western blot及免疫组化分析测定NR2B的表达。
　　结果：Western blot结果显示：正常组和对照组中，NR2B在大脑皮层、海马组织及小脑组织中的蛋白水平正常表达；在大脑皮层、海马组织及小脑组织中，SAH后24小时的蛋白表达降低最为明显（P<0.01）；在大脑皮层中SAH后3-5天的蛋白水平明显降低(第3天P<0.05，第5天P<0.05)；在海马组织中SAH后3-7天的蛋白水平明显降低(第3天P<0.01，第5天P<0.05，第7天P<0.05)；在小脑组织中SAH后3-7天的蛋白水平明显降低(第3天P<0.01，第5天P<0.01，第7天P<0.05)；SAH后14天NR2B的蛋白表达与对照组无明显差异(P>0.05)。免疫组化（NR2B蛋白免疫反应性主要在神经元细胞，细胞质棕色黄染代表阳性）结果显示：在大脑皮层、海马组织及小脑组织中，正常组及对照组NR2B的阳性率较高，SAH后24小时阳性率降低最为明显（P<0.01）；在大脑皮层中SAH后3-7天阳性率明显降低（第3、5天 P<0.01，第7天 P<0.05），SAH后14天与对照组相比阳性率无明显差异(P>0.05)；在海马组织中SAH后3-5天NR2B阳性率明显降低(P<0.05)，SAH后7-14天与对照组相比阳性率无明显差异(P>0.05)；在小脑组织中SAH后3-7天阳性率明显降低（第3、5天P<0.01，第7天 P<0.05），SAH后14天NR2B阳性率趋于正常(P>0.05)。
　　结论：1. N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚单位NR2B在大鼠蛛网膜下腔出血模型后的1-7天中，大脑皮层、海马组织及小脑组织中蛋白的表达存在不同程度的降低，以24小时最为明显，至14天时基本恢复正常。2.大鼠蛛网膜下腔出血模型中，NR2B在不同脑组织中的蛋白表达存在差异，以大脑皮层最为明显，海马组织次之，小脑组织最不明显。
　　第二部分：RO25-6981对大鼠蛛网膜下腔出血后认知功能的影响
　　目的：蛛网膜下腔出血（SAH，subarachnoid hemorrhage）后NMDA受体NR2B亚基的拮抗剂RO25-6981对大鼠认知功能的影响及其作用机制的研究。
　　方法：72只成年健康雄性SD大鼠，随机分为四组：正常组、SAH组、安慰剂组和 RO25-6981组，经大鼠自体尾动脉（股动脉）非肝素化动脉血注入视交叉池致蛛网膜下腔出血模型，RO25-6981在造模前30分钟以10mg/kg腹腔注射，观察SD大鼠行为功能变化，进行神经功能评分，48小时后处死大鼠，取颞底皮层脑组织做标本，采用免疫组化法检测NR2B表达，在SAH后48小时开始进行Morris水迷宫试验测试大鼠认知功能的能力。
　　结果：1.与对照组相比，SAH组大鼠的神经认知功能降低，食欲及活动能力降低（P<0.05）；RO25-6981组与安慰剂组相比，大鼠的神经认知功能明显降低，食欲及活动能力明显降低（P<0.01）；SAH组和安慰剂组之间无统计学意义。2.免疫组化（NR2B蛋白的免疫反应主要存在于神经元细胞，细胞质颜色呈棕色黄染则代表为阳性）结果显示：对照组NR2B的阳性率较高；与对照组相比，SAH组NR2B阳性率明显降低(P<0.01)；SAH组与安慰剂组对比无明显差异(P>0.05)；RO25-6981组中NR2B阳性率显著低于SAH组及安慰剂组(P<0.01)。3.在Morris水迷宫试验测试中，与正常组相比，SAH组及安慰剂组的学习记忆功能明显下降（P<0.01），且 SAH组及安慰剂组无统计学差异（P>0.05）。RO25-6891组与安慰剂组相比，大鼠的学习记忆能力进一步显著下降（P<0.01）。
　　结论：NR2B拮抗剂—RO25-6981可能通过对NR2B受体的拮抗作用使蛛网膜下腔出血后大鼠的认知功能障碍进一步加重。

目录

封面

中文摘要

英文摘要

目录

前言

参考文献

第一部分 NR2B在大鼠蛛网膜下腔出血后脑组织中的表达研究

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分 RO25-6981对大鼠蛛网膜下腔出血后认知功能的影响

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述

参考文献

中英文缩略词表

攻读硕士期间公开发表的论文

致谢