3号染色体短臂抑癌基因CpG岛甲基化表型与胃癌关系的研究

摘要

本文从以下几部分进行了论述。
　　第一部分 RASSF1A基因启动子甲基化与胃癌风险的Meta分析
　　目的:利用已发表相关文献中的数据进行系统性Meta分析,以期明确RASSF1A基因启动子甲基化与胃癌发生的关系。
　　方法:使用PubMed和Web of Science数据库搜索2013年7月以前所有相关文献。如果某研究属于病例-对照研究,且RASSF1A基因启动子甲基化的频率能在文中获取,那么该研究将被纳入我们的Meta分析。所有的数据由2位研究者独立检索并按照制定的数据收集标准进行收集。使用优势比(OR)及其95％可信区间(95％CI)来衡量RASSF1A基因启动子甲基化与胃癌风险之间的关系。使用基于卡方检验的Q检验和敏感性分析,评估不同研究间潜在的异质性,用漏斗图检验发表偏倚。
　　结果:纳入文献11篇,共涉及研究病例1215例。将所有数据纳入Meta分析,结果显示RASSF1A基因启动子甲基化与胃癌风险有密切相关性(OR,12.67;95％CI,8.12-19.78;P<0.001),且纳入的文献之间不存在异质性。亚组分析进一步表明,RASSF1A基因甲基化的个体与未发生甲基化的个体相比,患胃癌的风险显著增加。整体和亚组分析均没有发现发表偏倚。
　　结论:RASSF1A基因启动子甲基化显著增加胃癌的发病风险,RASSF1A基因启动子甲基化有希望成为潜在的胃癌风险预测因子。
　　第二部分胃癌中3号染色体短臂抑癌基因甲基化表型状态
　　目的:研究3号染色体短臂(3p)抑癌基因启动子区CpG岛甲基化表型(CIMP)在胃癌及对照癌旁组织中表达状态,分析其与胃癌患者临床病理及预后的关系。
　　方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测100例胃癌组织及其对应癌旁组织中hOGG1、VHL、hMLH1、SEMA3B、RASSF1A、BLU、FHIT和RAR-B共8个抑癌基因启动子区甲基化表型状态。CIMP阳性定义为每份样本中同时有四个或多于四个基因同时甲基化。
　　结果:100例胃癌组织样本中有99例(99％)表现出至少有一个基因的启动子区呈现甲基化,胃癌组织中hOGG1、VHL、hMLH1、SEMA3B、RASSF1A、BLU、 FHIT和RAR-B基因启动子区甲基化阳性率分别为7％、9％、58％、56％、43％、64％、67％和18％,对应癌旁组织中各基因甲基化阳性率分别为2％、2％、8％、35％、5％、55％、25％和13％。两组间VHL、hMLH1、SEMA3B、RASSF1A和FHIT基因的甲基化阳性率存在显著差异(P=0.030,P<0.001,P=0.003,P<0.001和P<0.001)。胃癌组织和对照癌旁组织中CIMP阳性率分别为44％和4％,两组间有显著差异(P<0.001)。胃癌组织 CIMP阳性与肿瘤分化程度密切相关,分化程度越差其CIMP阳性率越高(P=0.004);与淋巴结转移亦显著相关,伴淋巴结转移者其CIMP阳性率较无淋巴结转移者显著增高(P=0.005);与其余病理特征包括性别、年龄、肿瘤直径、临床分期和TNM分期均无关(P>0.05)。CIMP阴性组和阳性组患者中位生存时间分别为31和15个月,生存率差异有统计学意义(P=0.009)。Cox回归多因素分析显示,CIMP是影响胃癌患者预后的独立因素(OR,4.3063;95％CI,1.7158-10.8084;P=0.002)。
　　结论:3pCIMP阳性率在胃癌组织和正常胃黏膜中有显著差异,3pCIMP异常状态可能在胃癌形成的早期已经发生,可能影响肿瘤分化、导致淋巴结转移,可作为预测胃癌患者预后的重要指标。
　　第三部分外周血中3号染色体短臂抑癌基因甲基化表型状态与胃癌易感关系的病例-对照研究
　　目的:研究3pCIMP在癌血样本和正常人外周血细胞样本中的阳性率差异,研究其与胃癌易感性的关系。
　　方法:采用MSP方法检测100例胃癌外周血及70例正常人外周血白细胞中hOGG1、VHL、hMLH1、SEMA3B、RASSF1A、BLU、FHIT和RAR-B共8个抑癌基因启动子区甲基化状态。
　　结果:胃癌组和对照组hOGG1和VHL基因都未发现甲基化异常,故将这两个基因排除,胃癌组6个抑癌基因启动子区甲基化阳性率分别为:hMLH124.0％(24/100), SEMA3B62.0％(62/100),RASSF1A20.0％(20/100),BLU48.0％(48/100),FHIT50.0％(50/100)和 RAR-B6.00％(6/100);对照组各基因甲基化阳性率明显降低:hMLH17.1％(5/70),SEMA3B28.6％(20/70),RASSF1A2.9％(2/70),BLU35.7％(25/70),FHIT25.7％(18/70)和 RAR-B4.3％(3/70)。两组间hMLH1、SEMA3B、FHIT和RASSF1A基因甲基化阳性率有显著差异(P=0.004,P=0.000,P=0.001,P=0.001)。胃癌组与对照组血样中的CIMP阳性率分别为30％(30/100)和4.3％(3/70),两组间CIMP阳性率有显著差异(P<0.001)。3pCIMP阳性与肿瘤低分化及淋巴结转移密切相关(P=0.019,P=0.032)。Logistic回归分析显示,FHIT、hMLH1、SEMA3B、RASSF1A基因启动子区甲基化和3pCIMP阳性与胃癌风险有密切相关性(OR2.78,95％CI1.32-5.45;OR3.89,95％CI1.37-10.89;OR3.97,95％CI1.97-7.27;OR3.97,95％CI1.97-7.27;OR8.37,95％CI1.87-35.33;OR9.53,95％CI2.63-30.83),敏感性分别为50％、24％、62％、20％和30％,特异性分别为74.3％、92.9％、52.9％、97.1％和95.7％,阳性预测值分别为73.5％、82.8％、75.6％、90.9％和90.9％,准确度分别为60％、52.4％、65.9％、51.8％和57.1％。
　　结论:胃癌患者和正常人对照的外周血细胞3pCIMP阳性率有显著差异,3pCIMP阳性可以显著增加胃癌的发病风险(OR9.53,95％CI2.63-30.83),将有可能成为胃癌有用的易感预测因子,3pCIMP阳性可能是胃癌低分化和淋巴结转移的预测指标。

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序言

参考文献

第一部分 RASSF1A基因启动子甲基化与胃癌风险的Meta分析

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 胃癌中3号染色体短臂抑癌基因甲基化表型状态

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第三部分 外周血中3号染色体短臂抑癌基因甲基化表型状态与胃癌易感关系的病例-对照研究

材料与方法

结果

讨论

参考文献

结论

综述

攻读学位期间发表的论文

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