共刺激分子B7-H1对小鼠髓源性抑制细胞免疫抑制功能的调节作用研究

摘要

目的:随着机体衰老,年龄相关疾病包括肿瘤发病率显著增高,提示衰老与免疫功能相关。髓源性抑制细胞是一群功能强大的免疫抑制性细胞群体,其在肿瘤免疫逃逸中发挥了关键作用。但是,衰老与MDSCs功能的关系,特别是作用机制并不清楚。因此,本课题目的在于探究髓源性抑制细胞(MDSCs)上协同刺激分子(B7-H1)在增龄相关MDSCs免疫抑制功能中的作用。
　　方法:健康C57BL/6J老年组(18个月龄)及青年组(6-8周龄)小鼠各18只。通过流式细胞分析法测定各组小鼠MDSCs上负性协同刺激因子(B7-H1,B7-H3,B7-H4及CD40)的表达水平,并分别通过免疫磁珠分选法及小鼠淋巴结研磨方法,选得MDSCs及T细胞。T细胞增殖干预实验分5组进行:T细胞羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)未标记组;T细胞CFSE标记组;T细胞标记CFSE+老年MDSCs组;T细胞标记CFSE+青年MDSCs组以及T细胞标记CFSE+老年MDSCs+B7-H1抗体阻断组,在CD3连和CD28提供刺激信号的前提下进行混合培养,观察青年和老年MDSCs抑制T细胞增殖的差异,并评估B7-H1是否为造成这种差异的关键分子。运用realtimePCR方法筛选青和老年MDSCs中可能与B7-H1表达相关的差异性基因;在此基础利用添加实验,体外分析老龄MDSCs表达B7-H1的调控机制。
　　结果:①与青年组比较,老年组MDSCs表达B7-H1水平显著升高(t=3.27,P<0.05)。
　　②老年组MDSCs能明显抑制T细胞的增殖(t=5.42,P<0.05)而青年组MDSCs对T细胞的干预作用不明显(t=0.64,P>0.05),老年MDSCs加B7-H1抗体阻断组T细胞增殖被明显逆转,差异有统计学意义(t=8.28,P<0.05),提示B7-H1在增龄相关MDSCs抑制功能中发挥了重要作用。
　　③qRT-PCR以及MDSCs刺激试验结果显示炎性因子IL-10是青年和老年MDSCs上B7-H1差异性表达的重要调控机制。
　　结论:负性协同刺激分子B7-H1是增龄相关MDSCs发挥免疫抑制功能的重要机制;炎性因子IL-10是B7-H1分子在青年和老年MDSCs之间差异表达的关键因子。

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引言

1.1 论文的研究背景

1.2 国内外研究现状

1.3 主要研究内容

实验设备、材料和方法

2.1 主要实验设备

2.2 实验材料和试剂

2.3 实验方法

实验结果

3.1 与青年组相比老年组脾脏MDSCs上协同共刺激分子B7-H1表达明显升高

3.2 老年MDSCs较青年MDSCs能明显抑制T细胞的增殖，老年MDSCs加了B7-H1抗体阻断以后这一效应却能被明显逆转

3.3 与青年小鼠相比，老年鼠MDSC中IL-10表达显著增高

3.4 IL-10 可能是调节青、老年MDSCs上B7-H1表达差异的关键因子

讨论

结论

参考文献

综述

攻读学位期间公开发表的文章

附录

致谢