Ahi1/Hap1蛋白复合体参与抑郁样行为的发生

摘要

目的:观察 Ahi1/Hap1蛋白复合体在抑郁发生后及予以抗抑郁药治疗后的变化,探讨抑郁症可能的发病机制。
　　方法:将ICR小鼠随机分为2组,对照(Con)组、实验(Stress)组;采用空间行为限制建立小鼠抑郁样表型模型;通过小鼠行为学实验(如强迫游泳实验和悬尾实验)观察小鼠是否存在抑郁样表型;采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定脑组织中五羟色胺(serotonin,5-HT)、多巴胺(dopamine, DA)这两种神经递质的含量;采用酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay method,ELISA)测定脑组织及血清中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、皮质醇的含量;使用Western bolt法测定不同部位脑组织内Ahi1、Hap1蛋白的表达情况;用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)测定脑组织内信使核糖核苷酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)的含量。为研究Ahi1、Hap1蛋白是否作为抗抑郁药治疗作用的一个靶点,将小鼠随机分为4组, Con+盐水(NS)组、Con+丙咪嗪(IM)组、Stress+NS组、Stress+IM组。第一周对Stress组进行空间行为限制;第二周开始,空间行为限制前,IM组给予腹腔注射IM(20mg/kg体重), NS组给予腹腔注射相同剂量生理盐水;腹腔注射三周后观察行为学及脑组织中Hap1及Ahi1蛋白的改变。
　　结果:悬尾实验(Tail suspension test, TST)和强迫游泳实验(forced swimming test, FST)表明Stress组小鼠的不动时间较对照组明显增长(P<0.05);HPLC结果显示Stress组小鼠脑组织中5-HT、DA的含量明显降低(P<0.05);ELISA检测显示Stress组脑组织及血清中BDNF含量明显降低(P<0.05),血清中皮质醇含量明显升高(P<0.05)。Western blot结果显示Stress组不同部位脑组织内Ahi1、Hap1蛋白的表达降低;且造模时间越长,蛋白降低越明显。RT-PCR结果显示Stress组脑组织内Ahi1 mRNA的含量较Con组无明显变化((P>0.05)。造模一周后及 IM治疗三周后,实验结果显示Stress+IM组在TST、FST中不动时间较Stress+NS组明显缩短(P<0.05),糖水偏好实验中糖水消耗明显增加(P<0.05);Ahi1、Hap1蛋白的表达较Stress+NS组明显升高(P<0.05),与Con组无明显差异((P>0.05)。
　　结论:抑郁样表型的小鼠脑组织中Ahi1、Hap1蛋白的表达降低;使用抗抑郁药干预可反转Hap1、Ahi1蛋白的降低,提示Ahi1、Hap1蛋白可能在抑郁样行为的发生过程中具有调节作用,是抗抑郁药研究的的一个潜在靶点。

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前言

第一部分 空间行为限制建立小鼠抑郁样表型模型

材料和方法

1. 实验动物

2. 实验试剂和材料

3. 方法和步骤

4.统计方法

结果

1. 空间行为限制后小鼠存在抑郁样表型

2. 抑郁样表型小鼠存在神经递质、皮质醇及BDNF的改变

小结

第二部分 抑郁样表型小鼠脑组织中Ahi1、Hap1的表达情况

材料和方法

1. 实验动物

2. 实验试剂和材料

3.实验方法

4.统计方法

结果

1. 抑郁样表型小鼠脑组织内Hap1蛋白的表达减少

小结

第三部分 抗抑郁药对抑郁样表现小鼠脑组织中Ahi1、Hap1蛋白表达的影响

材料和方法

1. 实验动物

2. 实验试剂和材料

3. 实验方法

4. 统计方法

结果

1. 抑郁样表型小鼠使用抗抑郁药后抑郁样行为消失

2. 抑郁样表型小鼠使用抗抑郁药后Hap1、Ahi1蛋白表达恢复

小结

讨论

1. 抑郁样表型小鼠神经递质、BDNF及皮质醇的变化支持几大抑郁症发病机制学说

2. Ahi1、Hap1蛋白与抑郁症的发生相关

3. Ahi1、Hap1蛋白作为抗抑郁药物的靶点

结论

参考文献

综述

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