二氯醋酸二异丙胺抗肝纤维化作用的实验研究

摘要

目的：1.体外实验研究不同浓度二氯醋酸二异丙胺（Diisopropylamine Dichloroacetate, DPDA）对肝星状细胞及正常肝细胞增殖的影响。
　　2.体内实验研究DPDA对四氯化碳（Carbon tetrachloride, CCl4）诱导肝纤维化小鼠模型纤维化的逆转作用。
　　方法：1.体外实验：采用不用浓度的DPDA处理人肝星状细胞株LX2细胞及正常肝细胞株LO2细胞，用MTT法检测DPDA对两种细胞株增殖的影响；用Western Blot检测LX2细胞相关蛋白的表达情况。
　　2.体内实验：将50只雄性C57BL/6小鼠随机分成三组，即对照组（n=10），CCl4组（n=30，分为4w、8w、12w组），CCl4+DPDA组（n=10）。采用CCl4诱导法构建肝纤维化小鼠模型，腹腔注射含25％CCl4的橄榄油混合液，2μL/g体重，每周两次，共持续12周。CCl4（4w、8w组）分别于4w、8w末处死，取肝脏组织。CCl4+DPDA组于第8周开始使用DPDA（15mg/kg体重）灌胃处理，CCl4（12w组）于第8周开始使用等体积PBS灌胃处理，共灌胃4周。于12w末处死小鼠，取肝脏组织。标本行HE及Masson染色，对肝纤维化程度进行评价；RT-PCR、免疫组织化学、Western Blot检测各组小鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白（alpha-Sooth muscle actin,α-SMA）、肌间线蛋白（Desmin）、Ki67、转化生长因子（Transforming growth factor-beta1, TGF-β1）、纤维连接蛋白（Fibronectin, FN）、I型胶原mRNA和（或）蛋白的表达情况。
　　结果：不同浓度的DPDA作用于LX2细胞48h后，显示出明显的抑制增殖作用，IC50为（13.2±0.71）mmol/l；低浓度的DPDA对LX2细胞的增殖同样有抑制作用，且当DPDA浓度低于1mmol/l时，对LO2细胞有促增殖作用；与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。与CCl4组相比，CCl4+DPDA组的HE及Masson染色均显示小鼠肝纤维程度减轻；RT-PCR、免疫组织化学、Western Blot结果显示CCl4+DPDA组α-SMA、Desmin、TGF-β1、FN、I型胶原的mRNA和（或）蛋白的表达量下调。
　　结论：1.DPDA对肝星状细胞的增殖有明显抑制作用，低浓度时对正常肝细胞的增殖有促进作用。
　　2.DPDA对CCl4诱导纤维化小鼠模型的纤维化有逆转作用。
　　3.DPDA成为临床抗肝纤维化药物有一定可能性。

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引言

实验材料与方法

一、材料

二、方法

结果

一、MTT法检测不同浓度DPDA对LX2细胞和LO2细胞增殖的影响

二、不同浓度 DPDA 作用于 LX2 细胞后，观察细胞形态变化，并利用Western Blot检测与肝纤维化相关蛋白的表达情况

三、DPDA对CCl4诱导的肝纤维化小鼠有逆转疗效

讨论

结论

参考文献

综述: 肝纤维化的分子机制及治疗方法综述

缩略词表

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