人脐带间充质干细胞复合丝素蛋白多孔支架构建组织工程脂肪的实验研究

摘要

目的：1.探讨人脐带间充质干细胞（human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells, hUCMSCs）的体外分离、培养的方法，观察其生物学特性；2.探讨丝素蛋白多孔支架与hUCMSCs共培养构建组织工程脂肪的可行性。
　　方法：1.从新鲜的人脐带中获取华通氏胶，组织块法提取人脐带间充质干细胞，倒置相差显微镜下观察细胞形态，MMT法检测并绘制细胞生长曲线，流式细胞仪检测细胞表面特征性标记，成脂诱导培养21天，油红O染色观察成脂情况；2.hUCMSCs细胞接种于丝素蛋白多孔支架，观察细胞黏附率，MTT法测定及荧光染色观察细胞在支架上的生长情况，成脂诱导培养后RT-PCR检测细胞在支架上的成脂分化能力，将经成脂诱导培养后的细胞支架复合物接种于S-D大鼠体内，观察细胞支架复合物在体内的成脂能力。
　　结果：1.体外培养2周，组织块周围有梭形细胞游出；传代培养至第10代，细胞形态与增殖能力无明显变化；流式细胞仪检测CD44、CD105阳性，CD14、CD34阴性。成脂诱导培养后表明hUCMSCs具有成脂能力，油红O染色见细胞质中有红染的脂滴聚集。2.细胞在丝素蛋白多孔支架上有良好的黏附率，12h后平均黏附率超过80％。MTT法检测显示接种于丝素蛋白多孔支架上的细胞与贴壁培养的细胞生长曲线无统计学差异。荧光倒置相差显微镜下观察到，细胞与丝素蛋白支架共培养1～2天后细胞与支架充分附着，培养7～10天后生长活跃。共培养1周后序贯成脂诱导培养2周，RT-PCR检测细胞Oct-4表达减弱，表达aP2和LPL。将共培养1周序贯成脂诱导培养2周的细胞支架复合物植入S-D大鼠皮下，4周后取出，见有脂肪组织形成；8周后支架降解明显，有新生脂肪组织形成；12周后支架降解完全，脂肪组织形成明显；对照组无明显脂肪组织生成。
　　结论：1. hUCMSCs能在体外培养、扩增及表现间充质干细胞的生物特性；2. hUCMSCs具有向脂肪细胞方向分化的特性，可作为脂肪组织工程的种子细胞；3.丝素蛋白多孔支架与细胞共培养后并未影响细胞的生长及向脂肪方向分化，是一种理想的可降解生物支架，hUCMSCs与丝素蛋白支架共培养后可构建组织工程脂肪。

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前言

第一部分 人脐带间充质干细胞的分离培养及鉴定

一．实验材料与主要仪器

二．实验方法

三．结 果

四．讨 论

五．结 论

参考文献

第二部分 人脐带间充质干细胞结合丝素蛋白多孔支架构建组织工程脂肪的研究

一．实验材料与主要仪器

二．实验方法

三．结 果

四．讨 论

五．结 论

参考文献

综述:脂肪组织工程种子细胞的探讨

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