载脂蛋白M-1-磷酸鞘氨醇轴在巨噬细胞炎症中的作用

摘要

目的：明确载脂蛋白M（apolipoprotein M，apoM）在外周血细胞表面的表达情况，探讨apoM在炎症中的作用及可能机制。
　　方法：采集健康成年志愿者新鲜全血，经淋巴细胞分离液分离后，CD3、CD19、CD14、CD56和CD16抗体分别标记T细胞、B细胞、单核细胞、NK细胞，用藻红蛋白（P-phycoerythrin，PE）标记apoM，流式细胞仪及激光共聚焦分别检测不同细胞亚群上apoM蛋白的表达情况。
　　以人单核细胞THP-1细胞为研究对象，体外构建巨噬细胞炎症模型。实验分组：（1）对照组；（2）10μg/ml人重组apoM蛋白单独预处理3h；（3）10μg/ml人重组apoM蛋白预处理细胞3h，10ng/ml脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）孵育6h；（4）10ng/mlLPS孵育6h。双重荧光定量PCR法（dual fluorescent quantitative real-time PCR）检测肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白介素1β（Interleukin1 beta，IL-1β）的mRNA水平。
　　用1-磷酸鞘氨醇受体2（Sphingosine1 Phosphatereceptor2，S1P2）拮抗剂JTE-013（30μM）、激动剂CYM-5520（1μM、10μM、50μM）和S1P1、S1P3、S1P4、S1P5激动剂FTY720（10μM）分别预处理巨噬细胞0.5h，再用人重组apoM蛋白孵育9h，采用双重荧光定量PCR法检测TNF-α和IL-1β的mRNA水平。
　　结果：激光共聚焦结果显示，T细胞、B细胞、NK细胞和单核细胞表面均表达apoM蛋白。流式细胞检测结果显示，apoM在CD14+单核细胞上表达的比例最高，达到14.4％，其次为CD3+T细胞，表达比例为7.4％，CD19+B细胞、CD56+NK细胞和CD16+NK细胞表达apoM的比例分别为6.2％、2.4％和4.2％。
　　LPS刺激巨噬细胞可显著上调TNF-α和IL-1β的mRNA表达水平，人重组apoM蛋白和LPS共同处理组TNF-α和IL-1β的mRNA表达水平与LPS单独刺激组相比分别升高1.15和1.21倍（P值分别为0.0383和0.0034）。
　　在体外，apoM重组蛋白单独作用可显著上调巨噬细胞中TNF-α和IL-1β的mRNA的表达（分别升高2.09倍和1.35倍，P值为0.0007和0.0026）。JTE-013和apoM重组蛋白共同处理组与单独apoM重组蛋白处理组相比，TNF-α和IL-1β的mRNA水平升高1.86和1.65倍（P值均小于0.0001），CYM-5520和apoM重组蛋白共同处理组与apoM单独处理组相比，TNF-α和 IL-1β的表达显著降低（分别降低1.41和1.24倍，P值为0.0406和0.0275）。双因素方差分析显示apoM和JTE-013对巨噬细胞TNF-α、IL-1βmRNA表达水平的交互作用有统计学意义（P＜0.01）。FTY720和apoM重组蛋白共同作用也能显著抑制巨噬细胞TNF-α、IL-1βmRNA表达（分别降低1.48和1.6倍，P值均小于0.0001），但双因素方差分析显示apoM和FTY720对巨噬细胞TNF-α、IL-1βmRNA表达水平的交互作用没有统计学意义（P＞0.05）。
　　结论：健康人外周血单个核细胞中，T细胞、B细胞、NK细胞和单核细胞都表达apoM蛋白，单核细胞表达量最高。人重组apoM蛋白能够促进LPS介导的巨噬细胞TNF-α和IL-1βmRNA水平的表达。JTE-013能够影响人重组apoM的促炎作用，人重组apoM蛋白可能通过S1P2受体途径发挥其促炎作用。

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第一部分 健康人外周血单个核细胞上apoM蛋白的表达

一、前言

二、材料与方法

三、结果

四、讨论

第二部分 S1P2受体降低apoM引起的巨噬细胞炎症因子的表达

一、前言

二、材料与方法

三、结果

四、讨论

结论

参考文献

综述: 载脂蛋白M启动子区基因多态性的临床研究进展

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