TLR2在小鼠哮喘模型中的作用及相关机制的实验研究

摘要

第一部分、TLR2在小鼠哮喘模型中作用的实验研究
　　目的：探讨TLR2在小鼠哮喘模型中的作用。
　　方法：实验分成三组：TLR2-/-小鼠哮喘模型组、C57BL/6小鼠哮喘模型组及对照组。每组8只。以OVA致敏并激发建立小鼠哮喘模型。收集单侧肺泡灌洗液，离心分离细胞，涂片镜检进行细胞分类计数；取另一侧部分肺组织进行HE染色，观察肺组织病理学改变，取另一侧肺组织剩余部分采用RT-PCR法检测IL-4、IL-5、IL-13 mRNA的表达水平。
　　结果：肺组织切片HE染色显示，TLR2-/-哮喘组中血管周围组织炎症细胞浸润程度较C57BL/6哮喘组减轻，没有气道上皮细胞坏死脱落，差异有统计学意义（P<0.05）。TLR2-/-哮喘组BALF中嗜酸性细胞、淋巴细胞较C57BL/6哮喘组明显减少，巨噬细胞明显增多，两组之间差异有统计学意义（P<0.05）。C57BL/6哮喘组嗜酸性细胞、淋巴细胞计数与对照组比较均明显增多，而巨噬细胞明显减少，两组之间差异有统计学意义（P<0.05）。三组小鼠BALF的中性粒细胞计数差异无统计学意义（P>0.05）。RT-PCR检测肺组织中IL-4、IL-5、IL-13 mRNA的表达，结果显示TLR2-/-哮喘组、C57BL/6哮喘组、对照组均有表达，TLR2-/-哮喘组肺组织中IL-4、IL-5、IL-13 mRNA表达水平与C57BL/6哮喘组相比均明显降低，差异有统计学意义（P<0.05），但是仍高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：TLR2参与小鼠哮喘模型气道炎症的发展进程，OVA诱导的实验性过敏性哮喘是部分依赖于TLR2的。
　　第二部分、TLR2-/-小鼠哮喘模型信号转导途径抗炎机制的实验研究
　　目的：探讨TLR2发挥作用的可能的信号转导通路。
　　方法：实验分为三组：TLR2-/-哮喘组、C57BL/6哮喘组及对照组，每组8只。以OVA致敏并激发建立小鼠哮喘模型。肺组织石蜡切片行免疫组化法（Envision二步法）检测Akt、p-38、ERK、NF-κB p65及磷酸化Akt、p-38、ERK等蛋白表达水平。
　　结果：在对照组小鼠肺组织中，只检测到非磷酸化ERK。TLR2-/-哮喘组肺组织中Akt、p38、NF-κB p65及磷酸化Akt、ERK、p38与C57BL/6哮喘组相比，明显减少，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：TLR2敲除后能够减轻哮喘小鼠气道的过敏性炎症，是通过抑制Akt和ERK信号途径的调节实现的。
　　第三部分、TLR2-/-哮喘小鼠肺部APC亚群的确立
　　目的：探讨APC亚群在TLR2-/-哮喘小鼠肺部的组成及各个APC细胞亚群的变化情况，以明确APC亚群在TLR2-/-小鼠哮喘发生及发展中的地位。
　　方法：实验分为四组：TLR2-/-哮喘组、TLR2-/-对照组、C57BL/6 哮喘组及C57BL/6对照组，每组8只。以OVA致敏并激发建立小鼠哮喘模型。采用流式细胞仪技术检测肺组织细胞悬液中CD103+DCs、CD11b+DCS、pDCs、肺泡巨噬细胞、间质巨噬细胞等细胞亚群的表达情况。
　　结果：TLR2-/-哮喘组肺组织中间质巨噬细胞表达水平较C57BL/6哮喘组明显增多，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：TLR2敲除后气道过敏性炎症减轻可能是通过间质巨噬细胞的保护作用实现的。
　　第四部分、哮喘患儿血浆IL-33及IL-4水平及相关性的研究
　　目的：探讨哮喘患儿血浆中IL-33的表达水平及与IL-4水平的相关性。
　　方法：实验分组：哮喘急性发作组，22例；喘息组，20例；对照组，18例。采用ELISA法检测血浆中IL-33及IL-4蛋白的表达情况，分析IL-33与IL-4的相关性。
　　结果：哮喘急性发作组血浆中IL-33蛋白水平较喘息组、对照组明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；哮喘急性发作组血浆中IL-4蛋白水平较喘息组、对照组明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；IL-33与IL-4之间存在正相关关系（r=0.578,P<0.05）。
　　结论：哮喘急性发作时血浆IL-33水平上调，能够增加IL-4表达，从而促进哮喘的气道炎症发展。

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前言

第一部分 TLR2在小鼠哮喘模型中作用的实验研究

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 TLR2-/-小鼠哮喘模型信号转导途径抗炎机制的实验研究

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第三部分 TLR2-/-哮喘小鼠肺部APC亚群的确立

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第四部分 哮喘患儿血浆IL-33、IL-4的表达及相关性的研究

材料与方法

结果

讨论

参考文献

结论

综 述：TLR 2在支气管哮喘中的作用

攻读博士学位期间发表文章

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