绿茶提取物对瑞舒伐他汀药代动力学的影响及机制研究

摘要

目的：通过大鼠体内药代动力学的研究考察绿茶提取物对瑞舒伐他汀的影响，探讨绿茶对瑞舒伐他汀的作用机制，以期为临床绿茶与瑞舒伐他汀的合理服用提供依据。
　　方法：⑴绿茶提取物在大鼠体内对瑞舒伐他汀药代动力学的影响：将雄性SD大鼠分为五组：瑞舒伐他汀对照组（1 mg·kg-1）、绿茶提取物对照组（200 mg·kg-1）、瑞舒伐他汀（1 mg·kg-1）分别与三组不同剂量绿茶提取物（100 mg·kg-1、200 mg·kg-1、500 mg·kg-1）合用组。每组6只大鼠进行血浆药代动力学实验，灌胃给药，给药前后各时间点采集血样。使用UPLC-MS/MS法测定血浆瑞舒伐他汀及表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）的浓度，WinNonlin软件的非房室模型计算血浆药动学参数，GraphPad软件对药代参数进行统计学分析。⑵绿茶提取物和儿茶素在Caco-2细胞模型中对瑞舒伐他汀摄取和转运过程中的影响：建立 Caco-2单层细胞模型，通过倒置显微镜观察细胞形态、测定跨膜电阻值（TEER）、监测模型两侧碱性磷酸酶的分化及考察荧光黄的渗透率等方法确证模型的建立。采用UPLC-MS/MS法测定细胞内和转运后HBSS溶液中瑞舒伐他汀的浓度，在 Caco-2细胞模型中考察绿茶提取物以及四种儿茶素对瑞舒伐他汀摄取及转运的影响。⑶绿茶提取物和儿茶素在OATP1B1-HEK293T细胞中对瑞舒伐他汀摄取过程中的影响：以携带增强绿色荧光蛋白（EnhancedGreenFluorescent Protein）的GV144真核表达载体系统作为基因转导的媒介，构建OATPIBl-EGFP融合基因表达载体。通过观察荧光、Western blot检测EGFP蛋白以及阳性底物摄取实验验证转染活性的表达，建立瞬时表达转运体OATPB1的HEK293T细胞模型。采用UPLC-MS/MS法测定细胞内瑞舒伐他汀的浓度，在OATPB1-HEK293T细胞模型中考察绿茶提取物以及四种儿茶素对OATP1B1介导的瑞舒伐他汀转运的影响。⑷表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）在大鼠体内对瑞舒伐他汀药代动力学的影响：以EGCG占绿茶提取物2.4％的比例，计算200 mg·kg-1绿茶提取物的给药量相当于EGCG的给药量为4.8 mg·kg-1，对大鼠（N=6）灌胃给药EGCG（4.8 mg·kg-1）和瑞舒伐他汀（1 mg·kg-1）进行血浆药代动力学实验，使用UPLC-MS/MS法测定血浆瑞舒伐他汀及EGCG的浓度，WinNonlin软件的非房室模型计算血浆药动学参数，GraphPad软件对药代参数进行统计学分析。
　　结果：①绿茶提取物对大鼠体内瑞舒伐他汀的药代动力学的影响：三种不同剂量（100 mg·kg-1、200 mg·kg-1、500 mg·kg-1）绿茶提取物与瑞舒伐他汀合用后，瑞舒伐他汀的AUC0-∞分别增加了58.45%±53.04%、85.77%±48.12%和129.69%±69.48%，Cmax分别增加了73.96%±57.32%、192.23%±123.56%和152.28%±220.17%，清除率无统计学差异（p>0.05）。而绿茶提取物与瑞舒伐他汀合用后EGCG的药代动力学参数与绿茶提取物单用对照组相比没有发生显著变化（p>0.05）。②绿茶提取物对Caco-2细胞转运瑞舒伐他汀的影响：绿茶提取物使瑞舒伐他汀的摄取量（0.6289±0.0748 vs0.3245±0.0542 nmol·mg-1蛋白）和转运（4.3651±1.2410 x10-7vs2.0679±0.4370 x10-7cm·s-1）增加，儿茶素EC、EGC和ECG对其摄取和转运无影响，而 EGCG减少了瑞舒伐他汀的摄取（0.2511±0.0328 vs0.3245±0.0542 nmol·mg-1蛋白）和转运（1.1540±0.0762 x10-7 vs2.0679±0.4370 x10-7 cm·s-1）。③绿茶提取物和儿茶素对OATP1B1介导瑞舒伐他汀转运的影响：瑞舒伐他汀在转染后的HEK293T细胞中摄取量显著高于阴性对照（6.9882±0.6158 vs2.4471±0.4124 pmol·mg-1蛋白，p<0.05），表明成功表达转运活性。1.25μg·mL-1绿茶提取物能够减少OATPB1-HEK293T细胞对瑞舒伐他汀的摄取量（6.9882±0.6158 vs2.4471±0.4124 pmol·mg-1蛋白，p<0.05），而对应于茶叶提取物中含量的EG、EGC和ECG对其摄取无统计学差异，EGCG减少了瑞舒伐他汀的摄取量（6.9882±0.6158 vs3.1875±0.9679 pmol·mg-1蛋白，p<0.05）。④EGCG对大鼠体内瑞舒伐他汀的药代动力学的影响：EGCG与瑞舒伐他汀合用导致瑞舒伐他汀的AUC0-∞增加了64.24%±47.44%（77.99±22.52 vs47.48±11.71 h·μg·L-1，p<0.05）和Cmax增加了41.95%±83.38%（19.40±11.39vs13.66±7.01 ng·mL-1，p>0.05）。
　　结论：绿茶可提高瑞舒伐他汀体内的暴露量；可能的机制为增加小肠上吸收，以及抑制肝脏转运体OATP1B1对药物的转运从而减少瑞舒伐他汀在肝脏的分布；绿茶中 EGCG是绿茶引起瑞舒伐他汀药代动力学参数变化的主要原因；提示临床上服用他汀类药物时避免饮用绿茶以及避免服用含EGCG的其他饮料或食物。

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英文摘要

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前言

第一章 绿茶对瑞舒伐他汀在大鼠体内药代动力学的影响研究

前言

第一节 材料与仪器

第二节 实验方法

第三节 实验结果

结论与讨论

第二章 绿茶对瑞舒伐他汀在Caco-2细胞模型中转运的影响

前言

第一节 材料与仪器

第二节 实验方法

第三节 实验结果

结论与讨论

第三章 绿茶对瑞舒伐他汀在OATP1B1转染HEK293T细胞模型中摄取的影响

前言

第一节 材料与仪器

第二节 实验方法

第三节 实验结果

结论与讨论

第四章 EGCG对瑞舒伐他汀在大鼠体内药代动力学的影响研究

前言

第一节 材料与仪器

第二节 实验方法

第三节 实验结果

结论与讨论

全文总结及展望

参考文献

综述:绿茶与转运体底物药物的相互作用

英文缩略词

攻读硕士学位期间学术成果

致谢