抗PD-L1单抗及EGFR-TKI对EGFR敏感突变肺癌细胞PD-L1的表达及T细胞的影响

摘要

目的:
　　探讨肺癌患者血清中可溶性程序性死亡配体1（soluble programmed death ligand-1,sPD-L1）的表达及临床意义；观察表皮生长因子受体（EGFR）野生型和敏感突变型肺癌细胞株膜型及sPD-L1分子的表达水平，并探讨抗PD-L1单抗和EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）干预对EGFR敏感突变肺癌细胞及共培养体系中T淋巴细胞的影响。
　　方法:
　　1、采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测肺腺癌EGFR敏感突变患者22例（腺癌突变组）、肺腺癌EGFR野生型患者18例（腺癌野生组）、肺鳞癌患者28例（鳞癌组）及健康志愿者50例（对照组）sPD-L1表达水平；分析晚期肺腺癌sPD-L1与临床病理特征的关系。
　　2、采用流式细胞术（FCM）及ELISA检测厄洛替尼干预前后EGFR突变及野生型肺癌细胞株表面膜型PD-L1(mPD-L1)的表达及培养上清中sPD-L1的水平。
　　3、建立肺癌细胞与T细胞共培养体系，采用抗PD-L1单抗、厄洛替尼单独及联合对体系内肿瘤细胞和T淋巴细胞进行干预，用CCK-8法研究共培养体系中T淋巴细胞增殖的影响，ELISA法测定细胞上清IFN-γ的含量观察T淋巴细胞功能变化，并用流式细胞术检测厄洛替尼干预后对共培养体系中肿瘤细胞表面PD-L1的表达及T淋巴细胞凋亡的影响。
　　结果:
　　1、肺腺癌组和肺鳞癌组sPD-L1分子表达水平均高于对照组(P<0.01、P<0.01)；肺腺癌突变组和肺腺癌野生组相比sPD-L1分子表达差异无统计学意义（P>0.05）；晚期肺腺癌患者sPD-L1表达的高低与吸烟史及肿瘤的转移密切相关（P<0.05）；与患者性别、年龄及分期均无明显相关性（P>0.05）。
　　2、EGFR突变型细胞株（PC9、HCC827）高表达PD-L1，而EGFR野生型细胞株（H1299、A549）低表达PD-L1；厄洛替尼干预后EGFR突变细胞株mPD-L1表达水平分别均出现下调（均P<0.05），培养上清中sPD-L1明显降低（均P<0.01）；而EGFR野生型细胞株上述变化均无显著统计学意义。
　　3、在肺癌细胞株和T淋巴细胞共培养体系中，采用厄洛替尼干预可促进与EGFR突变型细胞共培养体系中T淋巴细胞增殖并抑制其凋亡（均P<0.01）；与厄洛替尼干预组相比，厄洛替尼联合抗PD-L1单抗干预组可进一步促进T淋巴细胞增殖并抑制其凋亡（均P<0.05）；在EGFR野生型细胞共培养体系中，厄洛替尼干预对T淋巴细胞增殖差异无统计学意义（均P>0.05）。抗PD-L1单抗与厄洛替尼联合干预对T淋巴细胞增殖亦无明显进一步促进作用（均P>0.05）。厄洛替尼干预可使EGFR突变细胞HCC827与T淋巴细胞共培养体系中IFN-γ分泌明显增高（P<0.01），HCC827细胞表面PD-L1出现明显下调（P<0.001），而EGFR野生型细胞株A549上述变化均无显著统计学意义。
　　结论：
　　1、晚期临床肺腺癌患者血清中sPD-L1表达的高低与吸烟史及肿瘤的转移有关，与EGFR敏感突变无明显相关性。
　　2、与EGFR野生型细胞株相比，厄洛替尼干预后，EGFR突变型细胞株sPD-L1出现下调，提示EGFR信号通路可以调控的PD-L1表达。
　　3、应用厄洛替尼干预，EGFR敏感突变的肿瘤HCC827细胞与T淋巴细胞共培养上清测得IFN-γ出现明显上升，提示在EGFR敏感突变的肿瘤中EGFR-TKIs可促进T淋巴细胞对肿瘤的免疫杀伤。
　　4、厄洛替尼联合抗PD-L1单抗干预EGFR突变型细胞与T细胞共培养体系，可进一步促进体系中T细胞增殖并抑制其凋亡，且使T细胞分泌IFN-γ明显增高，提示联合应用抗PD-L1单抗及EGFR-TKI可能有效提高机体对抗EGFR敏感突变非小细胞肺癌的能力。