泛素蛋白酶体系统在氧化低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤中的作用及其与自噬间的关系研究

摘要

目的:
　　观察泛素蛋白酶体系统在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤中的作用，探讨其初步机制，并研究其与自噬及凋亡之间的关系。
　　方法:
　　1.运用不同浓度及时间点的ox-LDL处理HUVECs，采用免疫印迹技术检测泛素、及E1泛素激活酶、E2泛素结合酶、E3泛素连接酶的表达，观察ox-LDL对HUVECs泛素蛋白酶体水平的影响。2.在自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）及泛素蛋白酶体抑制剂MG-132的干预下，采用免疫印迹技术检测泛素、自噬标记蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达变化，观察在ox-LDL损伤HUVECs过程中泛素蛋白酶体途径与自噬之间的关系。3.运用不同浓度及时间点的ox-LDL处理HUVECs，采用免疫印迹技术检测溶酶体酶(cathepsin B、cathepsin D)的表达，观察ox-LDL对HUVECs溶酶体酶水平的影响。4.在泛素蛋白酶体抑制剂MG-132的干预下，采用免疫印迹技术检测溶酶体酶（cathepsin B、cathepsin D）的表达变化，进一步探讨ox-LDL损伤HUVECs过程中泛素蛋白酶体途径与自噬、凋亡之间的关系。
　　结果:
　　1.ox-LDL作用能上调HUVECs的泛素蛋白(Ubiquitin)表达，并呈剂量依赖性。免疫印迹技术结果显示，ox-LDL(100μg/ml)上调HUVECs中Ubiquitin表达的作用在12h和24h出现两个高峰。ox-LDL(100μg/ml)作用12h和24h也能显著上调HUVECs中E1、E2、E3酶的表达;2.3-MA能抑制ox-LDL引起的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达上调，同时对HUVECs Ubiquitin的表达无明显影响。MG-132在抑制ox-LDL上调Ubiquitin的同时能上调HUVECs LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达。3.ox-LDL作用12h能被HUVECs大量吞噬，并促进HUVECs增殖，该作用能被3-MA及MG-132明显抑制。4.ox-LDL(100μg/ml)作用能上调HUVECs中cathepsin B和cathepsin D表达，此作用在24小时达到高峰。5.MG-132可抑制ox-LDL介导的cathepsin B和cathepsin D的表达上调。
　　结论:
　　ox-LDL能促进HUVECs增殖，并诱导其发生自噬和坏死。ox-LDL对HUVECs的损伤与其被细胞吞噬后的降解障碍有关，亦能诱导细胞凋亡，其可通过泛素蛋白酶体及自噬两条途径降解，泛素蛋白酶体为首要途径。泛素抑制剂MG-132能通过抑制ox-LDL诱导的细胞增殖，增强自噬，抑制凋亡，从而对ox-LDL所致的HUVECs损伤起保护作用。

目录

声明

摘要

研究背景

第一部分 氧化低密度脂蛋白对血管内皮细胞泛素蛋白酶体活性的影响

材料和方法

结果

讨论

第二部分 氧化低密度脂蛋白在血管内皮细胞降解过程中泛素蛋白酶体与自噬的关系

第一节 3-MA对氧化低密度脂蛋白上调内皮细胞泛素及自噬水平的影响

材料和方法

结果

第二节 MG-132对氧化低密度脂蛋白上调内皮细胞泛素及自噬水平的影响

材料和方法

结果

讨论

第三部分 氧化低密度脂蛋白对血管内皮细胞溶酶体酶表达的影响

第一节 氧化低密度脂蛋白对血管内皮细胞溶酶体酶表达的影响

材料和方法

结果

第二节 MG-132对氧化低密度脂蛋白上调内皮细胞溶酶体酶水平的影响

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述 泛素在自噬依赖性蛋白聚合物演变过程中的作用

攻读博士学位期间公开发表的论文、论著

致谢