定心方对氧化低密度脂蛋白诱导损伤的人脐静脉内皮细胞Ang1-Tie2通路及血管生成的影响

摘要

目的:从定心方(DXR)含药血清对氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导损伤的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)Angiopietin/Tie2(Ang1-Tie2)通路及血管形成的影响,研究DXR防治动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的机制. 方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,采用OX-LDL1OOmg/ml损伤人脐静脉内皮细胞24h,分别观察DXR含药血清对其迁移及其小管形成的影响.采用免疫印迹法(Western Blot)检测血管内皮细胞生长因子(VEGF)和血管紧张素(Angiotensin1,Ang1)以及Ang1受体Tie2的表达.采用鸡胚尿囊膜实验观察(Chick embryo chorioallantoic membrane)DXR对体外血管生成的影响. 结果:经DXR作用24h后,DXR高剂量组(DXR15％浓度)、中剂量组(DXR215％浓度)、低剂量组(DXR320％浓度)、空白组HUVEC细胞迁移数目分别为155.75士34.93、235.75±7.41、269.50±14.15、133.50±60.25,与模型组(Model)281.50±39.79)相比,DXR1和DXR2组与Model组相比迁移细胞数量减少,有统计学差异(P＜0.05),DXR3、DXR2、DXR1、空白组鸡胚尿囊膜实验中形成的一级血管数目分别为5.80±3.20、8.40±4.32、17.00±12.42、5.40±1.50,二级血管数目分别为56.80±16.51、82.40±17.59、107.60±36.60、46.40±7.23,与Model组一级血管数目(30.40±9.18)、二级血管数目(145.60±32.02)相比,DXR3、DXR2、DXR1与Model相比,一级血管数量明显降低(P＜0.05),二级血管数量明显降低(P＜0.05).Western Blot实验显示:与Model组比,受DXR干预的HUVEC细胞中的Ang1蛋白和Tie2蛋白表达量上调,VEGF蛋白表达量下降.受DXR干预的HUVEC细胞形成小管密集程度明显低于Model组. 结论:体外实验结果表明DXR具有抑制血管生成的作用,这种效应与其可以调控HUVEC细胞内与血管生成密切相关的Ang1,Tie2,VEGF有关联.