OTUB1在人脑胶质瘤中表达情况及其促胶质瘤细胞迁移的相关研究

摘要

目的：
　　研究OTUB1在胶质瘤组织中的表达情况及其与胶质瘤患者预后的相关性，并探究其对胶质瘤细胞迁移能力的影响以及可能的相关机制。
　　方法：
　　（1）利用蛋白质免疫印迹方法检测正常脑组织和胶质瘤组织中 OTUB1及上皮标记蛋白E-cadherin的表达情况；应用免疫组化方法检测OTUB1和E-cadherin在89例胶质瘤石蜡标本中的表达情况，并分析两者表达情况的相关性；收集对应胶质瘤患者的临床病理资料，采用Pearsonχ2检验分析胶质瘤中OTUB1的表达与患者临床病理特征的关系；构建Kaplan-Meier生存曲线，运用Log-rank检验比较不同级别胶质瘤患者OUTB1表达情况对其生存率的影响。
　　（2）选取OUTB1高表达的胶质瘤细胞株(U87MG)作为实验对象，利用RNA干扰技术构建OTUB1稳定沉默的体外细胞模型，通过细胞划痕实验以及 Transwell迁移实验研究OTUB1对胶质瘤细胞迁移能力的影响。
　　（3）通过蛋白质免疫印迹方法检验OTUB1沉默后对上皮细胞-间充质转化标记分子 E-钙粘蛋白（E-cadherin），波形蛋白（Vimentin），蜗牛蛋白（Snail）以及细胞外基质降解相关的基质金属蛋白酶2（MMP2）和基质金属蛋白酶9（MMP9）表达情况的影响，探究OTUB1影响胶质瘤细胞迁移可能的相关机制。
　　结果：
　　（1）蛋白质免疫印迹及免疫组化的结果显示，OTUB1在胶质瘤组织中高表达，其表达水平随着胶质瘤病理级别的提升呈现出上升趋势，E-cadherin表达情况则和OTUB1相反，并且两者相关性分析呈负相关（r=-0.469，P<0.01）。此外，OTUB1与胶质瘤病人临床病理特征的统计分析显示其表达情况与胶质瘤病理级别存在统计学意义（P=0.005），分别在不同级别的胶质瘤病人中进行的Kaplan-Meier生存分析均表明OTUB1高表达的胶质瘤患者生存时间较短（P<0.05）。
　　（2）细胞划痕实验以及Transwell迁移实验表明沉默OTUB1可抑制胶质瘤细胞的迁移能力。蛋白质免疫印迹法显示抑制 OTUB1的表达可引起 Vimentin、Snail、MMP2、MMP9的表达下降，同时促使E-cadherin表达上升，说明OTUB1与胶质瘤细胞的上皮细胞-间充质转化以及细胞外基质降解有关。
　　结论：
　　（1）在人脑胶质瘤中，OTUB1的表达水平与胶质瘤病理分级成正相关，并且可以影响胶质瘤患者的预后情况，OTUB1高表达的胶质瘤患者预后更差。
　　（2）干扰OTUB1的表达可明显减弱胶质瘤细胞的迁移能力。
　　（3）沉默OTUB1导致间质标记蛋白Vimentin和Snail的表达下降、上皮细胞标记蛋白E-cadherin表达升高，此外还可以抑制基质金属蛋白酶MMP2、MMP9的表达。OTUB1促使胶质瘤细胞的上皮细胞-间充质转化以及细胞外基质的降解可能是其促胶质瘤细胞迁移的重要机制。

目录

声明

前言

材料和方法

1. 材料

2. 方法

结果

3. 1 OTUB1和E-cadherin在胶质瘤组织中的表达情况及相关性。

3.2 OTUB1与胶质瘤患者临床病理参数的关系。

3.3 OTUB1的表达水平对胶质瘤患者预后的影响

3.4 OTUB1在不同胶质瘤细胞株的表达情况。

3.5肿瘤迁移相关分子E-cadherin, Vimentin, Snail, MMP2和MMP9在不同胶质瘤细胞株的表达情况。

3.6 RNA干扰技术阻断胶质瘤细胞中OTUB1的表达。

3.7沉默OTUB1可抑制胶质瘤细胞的迁移能力。

3.8 OTUB1与胶质瘤细胞的上皮细胞-间充质转化及细胞外基质降解有关。

讨论

结论

参考文献

综述:胶质瘤侵袭相关机制与卵巢肿瘤相关蛋白酶1（OTUB1）功能的研究进展

攻读学位期间公开发表的论文

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致谢