大株红景天对心肌缺血—再灌注损伤的保护作用及其机制的研究

摘要

一、实验研究
　　目的:探讨红景天苷对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的防治作用和可能的机制，为中医药防治心肌缺血-再灌注损伤提供科学、客观的依据。
　　方法:健康雄性清洁级SD大鼠，体重240±10g。结扎大鼠左冠状动脉前降支，复制心肌缺血再灌注损伤（I/R）模型，按随机分配的原则分为6组（死亡的剔除），每组6只:假手术组(Sham)、心肌缺血-再灌注模型组(I/R)、红景天苷预防组（红景天苷+缺血再灌注，S+I/R）、红景天苷治疗组（缺血再灌注+红景天苷，I/R+S）、红景天苷预防组+P13K特异性抑制剂LY294002组（S+I/R+LY组）、红景天苷治疗组+P13K特异性抑制剂LY294002组（I/R+S+LY组）。假手术组只穿线不结扎，直接关胸。其他各组大鼠均穿线结扎冠状动脉左前降支(LAD)起始部，心肌缺血30分钟后剪断结扎线，使闭塞的冠脉再通，恢复冠脉血流和心肌的再灌注，造成I/R模型。心电图稳定10分钟后关胸。结扎成功的标志为:心电图标准导联上ST段上抬、QRS波出现形似左束支传导阻滞样的宽大畸形，左室前壁局部颜色苍白或紫绀。冠脉再通的标志为:抬高的ST段下降50％以上，QRS波幅变窄而低，缺血区心肌苍白或紫绀色转为红润。红景天苷预防组和预防组+LY组在造模前连续给药3天，1次/日，红景天苷12mg/kg腹腔注射;红景天苷治疗组和治疗组+LY组在再灌注即刻加予红景天苷12mg/kg腹腔注射，Sham组和I/R组均给予等量的生理盐水腹腔注射。预防+LY组和治疗+LY组于术前10min给予腹腔注射磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002(溶于DMSO)，0.3mg/kg/day。实验结束，各组大鼠经腹主动脉采集血样，通过ELISA试剂盒测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白(CTnⅠ)水平;取心肌组织，运用Evans'blue及TTC法双重染色，确定心肌梗死区/危险区比值;运用末端标记法(TUNEL)染色法检测心肌细胞凋亡并求出心肌细胞凋亡指数;采用Western Blot测定细胞内AKT、GSK3-b蛋白表达水平变化及磷酸化状态。
　　结果:
　　1.Sham组血清CK-MB、CTnⅠ水平、心肌梗死面积，凋亡指数低于其他组，无明显心肌缺血及梗死灶。
　　2.与I/R组相比，红景天苷预防组和红景天苷治疗组血清CK-MB、CTnⅠ水平明显下降，心肌梗死面积明显缩小，凋亡指数明显下降(P＜0.05)。
　　3.与红景天苷预防组相比，预防+LY组血清CK-MB、CTnⅠ水平明显上升，心肌梗死面积显著扩大，凋亡指数明显上升(P＜0.05)。
　　4.与红景天苷治疗组相比，治疗+LY组血清CK-MB、CTnⅠ水平明显上升、心肌梗死面积显著扩大、细胞凋亡指数显著升高(P＜0.05)。
　　5.红景天苷预防组和红景天苷治疗组组间比较，血清CK-MB、CTnⅠ水平，心肌梗死面积，凋亡指数均无明显差异(P＞0.05)。
　　结论:红景天苷对大鼠心肌缺血-再灌住损伤具有显著的保护作用，推测其可能机制主要与抗氧化作用及抑制心肌细胞凋亡、激活PI3K/AKT/GSK3-b信号通路等因素有关。
　　二、临床研究
　　目的:通过临床随机对照的方法，研究大株红景天注射液对急性心肌缺血患者血运重建后心肌缺血-再灌注损伤的干预作用，并探讨其可能的机制，为中药有效预防及治疗心肌缺血-再灌注损伤提供科学依据。
　　方法:将2013.12～2014.4在南京军区南京总医院心脏科和江苏省中医院心内科住院，行冠脉介入治疗(PCI)的患者作为研究对象，把符合西医诊断标准和中医辨证属心血瘀阻型的患者随机分为对照组(20例)，大株红景天注射液治疗组（30例）和丹参多酚酸盐注射液治疗组（30例），每组患者均根据指南推荐，运用西医常规治疗，包括肠溶阿司匹林、氯吡格雷、低分子肝素、硝酸酯类、ACEI或ARB、b-受体阻滞剂及必要的降压、降糖治疗。大株红景天注射液治疗组在西药治疗基础上加予大株红景天注射液10ml静脉滴注，1次/日;丹参多酚酸盐治疗组在西药治疗基础上加予丹参多酚酸盐0.2g静脉滴注，1次/日;住院治疗时间为3～7天。治疗期间停用其他任何中药制剂及中成药。患者于PCI术前、术后3d分别采取外周静脉血5ml，离心取血清检测心肌酶谱、心肌标志物、糖脂代谢指标、C反应蛋白（CRP）、白细胞介素—6（IL—6）、肿瘤坏死因子(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)等指标，并进行分析比较。
　　结果:
　　1.抗氧化反应指标:治疗前后组内比较，各组血清SOD、NO水平上升，P＜0.05，有统计学差异;与对照组比较，大株红景天组与丹参多酚酸盐组治疗后血清SOD、NO水平显著升高，P＜0.05;大株红景天组与丹参多酚酸盐组治疗后组间比较，血清SOD、NO水平变化无统计学差异，P＞0.05。
　　2.抗炎症反应指标:治疗前后组内比较，各组治疗后血清CRP、IL-6、TNF-α水平升高，P＜0.05;与对照组比较，大株红景天组与丹参多酚酸盐组治疗后血清CRP、IL-6、TNF-α升高水平低于对照组，P＜0.05;大株红景天组与丹参多酚酸盐组治疗后，血清CRP、IL-6、TNF-α水平组间比较，P＞0.05，无统计学差异。
　　结论:
　　1.ACS血运重建患者在常规西药治疗基础上加予大株红景天注射液，可以保护心肌，减轻MIRI，其机制可能与提高机体抗氧化应激反应、抑制炎症反应等有有关，对临床MIRI的防治具有一定的参考价值。
　　2.大株红景天注射液与丹参多酚酸盐注射液对ACS患者PCI术后心肌缺血再灌注损伤均有保护作用，两者疗效无显著差异，但均优于常规西药治疗。

目录

声明

摘要

英汉缩略词对照表

前言

第一部分 理论研究

1．心肌缺血再灌注损伤的现代医学研究概况

1．1 心肌缺血再灌注损伤机制

1．2．心肌缺血再灌注损伤的防治

2．心肌缺血再灌注损伤的中医研究进展

2．1 病名及临床表现

2．2 病因病机

2．3 辩证论治

2．4 治疗方法

2．5 中药防治MIRI的研究进展

2．6 大株红景天对再灌注心肌的保护作用研究

第二部分 实验研究

1．材料与方法

1．1 实验材料

1．2 实验方法

1．3．统计学方法

1．4．结果

2．结果与分析

2．1 大鼠心肌I／R的心电图表现

2．2 红景天苷对大鼠血清CK-MB、CTnⅠ的影响

2．3 红景天苷对大鼠心肌梗死范围的影响

2．4 红景天苷对I／R大鼠心肌细胞凋亡率的影响

2．5 各组AKT、GSK3-b蛋白表达水平及磷酸化状态

3．讨论

3．1 心肌缺血-再灌注模型的建立

3．2 红景天苷对缺血-再灌注大鼠心肌酶的影响

3．3 红景天苷对缺血-再灌注大鼠心肌梗死面积的影响

3．4 红景天苷对缺血-再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响

3．5 PI3K／AKT-GSK3-b信号通路

4．结论

第三部分 临床研究

1．研究目的

2．研究方法

2．1 研究对象

2．2 试剂盒和研究仪器

2．3 诊断标准

2．4 纳入标准

2．5 排除标准

2．6 病例剔除标准

2．7 中止试验标准

2．8 试验分组和治疗方法

2．9 标本采集及研究指标

3．0 数据处理及统计学分析

3．研究结果

3．1 基线资料比较

3．2．三组患者术前实验室检查结果比较

3．3 主要疗效指标观察

4．讨论

4．1 大株红景天注射液对MIRI的影响

4．2 大株红景天注射液对血清IL-6、TNF-α、CRP的影响

4．3 大株红景天对血清SOD的影响

4．4 大株红景天对血清NO的影响

5．结论

参考文献

附录

攻读硕士学位期间取得的成果

致谢