电针内关穴对氟哌利多处理大鼠QTc间期和心肌Cx43表达的影响

摘要

背景:氟哌利多是临床麻醉中常用的丁酰苯类药物，主要对中枢神经边缘系统、下丘脑、黑质和纹状体等部位的多巴胺受体产生阻断作用，因而具有强大的神经安定和镇吐作用，可与芬太尼合用于神经安定麻醉或小剂量单独用于恶心呕吐的防治。但美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration，FDA)于2001年，基于多起使用氟哌利多出现尖端扭转性室速猝死的病例，对其提出黑框警告，限制了氟哌利多的临床使用，但很多麻醉学者认为长期的临床麻醉实践了证实小剂量氟哌利多的安全性，其优良的止吐效果和低廉的价格优势使得目前尚无最佳的可替代药物，而FDA这一行为有失公允，在麻醉学界产生了广泛的争议。电针麻醉曾广泛用于临床实践并取得良好的效果，也是现代麻醉学对中华传统医学的重要应用和发展。近年来，电针广泛用于防治麻醉相关的不良反应，如恶心呕吐、缺血再灌注损伤和脏器功能不全等，在国际麻醉学研究中也有所报道，并越来越受重视。尤其是电针内关穴能产生较好的止吐效果，有研究还提示电针内关具有心血管保护和抗心律失常作用，而电针内关穴是否能减轻氟哌利多诱发的QT间期延长，尚缺乏相关研究。通过研究相关机制可以为临床麻醉使用电针提供理论支持，也有助于研究电针对相关药物的心脏毒性保护作用并推动电针在麻醉学中的应用，有重要的科研价值和社会意义，并有助于节约和降低医疗费用。缝隙连接蛋白是存在于相邻心肌细胞间的一种重要的膜通道蛋白，它参与了心肌细胞的电和化学信号的传导，并通过调控离子交换影响心肌细胞间的电偶联和机械收缩偶联。缝隙连接蛋白是由两个对称的连接子组成，每个连接子由连接蛋白的六聚体结构形成。心肌中最为重要的连接蛋白是缝隙连接蛋白43(connexin43，Cx43)，主要位于心肌细胞间的闰盘部位。相关文献认为Cx43密切参与了QT间期的形成，并对QT间期延长产生重要影响。心肌中Cx43蛋白的数量和分布变化会改变心肌细胞的电偶联状态，Cx43蛋白减少会降低心肌细胞电传导的均质性，心肌去极化和复极化时间延长，可能是QT间期延长的重要病理生理机制;而增加Cx43蛋白的含量和功能则可能改善心肌细胞间电传导的异质化，减弱QT间期的延长。
　　目的:(1)观察不同剂量的氟哌利多和电针内关穴预处理对大鼠QT间期的影响。(2)研究不同剂量的氟哌利多和电针内关穴预处理对大鼠Cx43mRNA和蛋白表达的影响。
　　方法:(1)动物分组:将雌性SD大鼠随机分成正常对照组C组（8只）、小剂量氟哌利多组DL组（8只）、大剂量氟哌利多组DH组（8只）、电针对照组EC组（8只）、小剂量氟哌利多电针预处理组EDL组（8只）和大剂量氟哌利多电针预处理组EDH组（8只）。C组经股静脉给予等量生理盐水，DL组经股静脉给予氟哌利多0.13mg/kg，DH组经股静脉给予氟哌利多1.3mg/kg，EC组预先电针左侧内关穴30min后经股静脉给予等量生理盐水，EDL组预先电针左侧内关穴30min后经股静脉给予氟哌利多0.13mg/kg，EDH组预先电针左侧内关穴30min后经股静脉给予氟哌利多1.3mg/kg。(2)使用Ⅱ导联监测并记录给药前0min、给药后5min、10min、15min、30min、60min和120min心电图，根据Bazett's公式QTc-B=QT/√(RR)计算大鼠QTc值。(3) RT-PCR法检测心室肌组织中Cx43mRNA表达情况，凝胶成像分析系统拍摄电泳条带，BandScan4.3软件进行灰度分析，将Cx43mRNA和内参基因GAPDHmRNA的光密度比值作为Cx43mRNA的表达水平。(4)Western blotting法检测心室肌组织中Cx43蛋白的表达，并采用放射自显影法记录影像，凝胶成像系统拍摄后，使用image Pro Plus6.0软件进行灰度分析，计算Cx43和内参蛋白GAPDH的光密度比值，作为Cx43蛋白的表达水平。(5)免疫组化法研究心室肌中Cx43的分布表达，心室肌组织经固定、切片、脱蜡、抗原-抗体反应和染色等步骤后，在光学显微镜40倍下观察切片中Cx43蛋白的表达情况，取3个高表达区域400倍下拍照保存，并使用Image Pro Plus6.0软件进行平均光密度分析。
　　结果:(1)电针内关穴对氟哌利多处理大鼠QTc间期的影响:①与正常对照组对比，小剂量氟哌利多组在5min、10min、15min和30min各时点QTc间期显著延长，P＜0.01差异有显著性;大剂量氟哌利多组与正常对照组对比，在5min、10min、15min、30min、60min和120min等时点QTc间期均显著延长，P＜0.01差异有显著性。②电针预处理后，EDL组在给药后5min和15minQTc值均显著低于DL组，P＜0.01差异有显著性;10min和30min各时点的QTc间期值均显著低于 DL组，P＜0.05差异有统计学意义。③电针预处理后，EDH组在给药后5min时QTc值显著低于DH组，P＜0.05差异有统计学意义;10min、15min、30min和60min时点的QTc值均显著低于DH组，P＜0.01差异有显著性。④电针内关穴与生理盐水注射对照组比，QTc间期无显著统计学差异。(2)电针内关对Cx43mRNA表达影响，Cx43mRNA表达水平EC组(0.92±0.03)和C组(0.84±0.02)比较，P＜0.05差异有统计学意义;EDL组(0.91±0.03)和DL组(0.84±0.02)相比较，P＜0.05差异有统计学意义; EDH组(0.73±0.02)和DH组(0.64±0.03)相比较，P＜0.05差异有统计学意义。(3) Western blotting法检测Cx43蛋白表达水平，EC组(1.46±0.15)和C组(1.09±0.08)比较，P＜0.01差异有显著性;EDL组(1.57±0.16)和DL组(1.09±0.10)相比较，P＜0.01，差异有显著性; EDH组(1.15±0.05)和DH组(0.96±0.08)相比较，P＜0.01差异有显著性。(4)免疫组织化学染色法检测心肌Cx43蛋白分布和表达:①C组Cx43阳性部分呈深棕色密集颗粒状分布于心肌细胞交界和闰盘处;DL组与C组类似;DH组Cx43蛋白呈淡棕黄色细颗粒状表达，呈散在点状分布于心肌细胞交界和闰盘处;EC组中Cx43蛋白呈深棕黄色粗线状广泛分布于心肌细胞交界和闰盘处;EDL组Cx43呈深棕黄色颗粒状分布于心肌细胞交界和闰盘处;EDH组心室肌中Cx43呈棕黄色颗粒状分布于心肌细胞交界和闰盘处。②Cx43蛋白平均光密度值在EC组(0.189±0.008)，C组(0.168±0.009)，二者比较，P＜0.01差异有显著性; Cx43蛋白平均光密度值在EDL组(0.202±0.009)，DL组(0.160±0.009)，二者比较，P＜0.01差异有显著性; Cx43蛋白平均光密度值在EDH组(0.198±0.009)，DH组(0.153±0.007)，二者比较，P＜0.01差异有显著性。
　　结论:1.氟哌利多呈剂量依赖性导致大鼠QTc间期延长。2.电针内关穴可减轻氟哌利多诱发的大鼠QTc间期延长。3.电针内关穴可上调心肌Cx43mRNA和蛋白的表达，从而减少氟哌利多造成的心肌细胞复极过程中动作电位的异质性，这可能是电针改善氟哌利多诱发QTc间期延长的机制之一。

目录

声明

摘要

英文缩略词表

第一章 绪论

第二章 电针内关穴对氟哌利多处理大鼠QTc间期的影响

2．1 材料与方法

2．2 结果

2．3 讨论

2．4 结论

第三章 电针内关穴对氟哌利多处理大鼠心肌Cx43表达的影响

3．1 材料与方法

3．2 结果

3．3 讨论

3．4 结论

参考文献

综述 P6(Neiguan)acupuncture and QT interval prolongation

内关穴临床应用个案报道 Termination of Paroxysmal Supraventricular Tachycardia with P6 acupressure

P6 electro-acupuncture improved QTc interval prolongation by upregulation of connexin 43 in droperidol treated rats

攻读期间取得的成果

致谢

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