基于TGF-β1/smad信号通路探讨扶正化瘀含药血清抑制肝癌细胞发生、发展的研究

摘要

研究背景:原发性肝癌是多发病、常见病，恶性程度高、预后凶险，其发病机制十分复杂，主要包括毒物、炎症等导致的肝脏组织损伤，癌基因或抑癌基因突变，肝干细胞和肝癌干细胞作用等，其中90％的肝癌发生发展基于肝脏慢性炎症。目前有研究发现TGF-β1/smad信号通路参与损伤反应的多个方面:纤维生成，细胞的生长、抑制和凋亡，在肝癌的发展和侵袭中发挥重要作用。中医药可以通过多靶点、多途径作用，减轻患者临床症状，延长生存期，提高生存质量，为肝癌的临床治疗提供新思路。大量临床研究表明，扶正化瘀方不仅对肝纤维化具有显著疗效，而且对肝癌前病变有一定的作用。本课题通过体外实验研究扶正化瘀含药血清对肝癌细胞7701和7402的影响，探讨其抗肿瘤作用效果及潜在的作用机制。
　　研究目的:研究扶正化瘀含药血清对2种肝癌细胞株的抑制作用和扶正化瘀方对TGF-β1/Smad信号通路的干预作用，探讨扶正化瘀方的体外抗肝癌作用及其可能存在的机制，以期为中药防治肝癌提供新的思路和科学实验依据。
　　研究方法:以肝癌细胞株QGY-7701和BEL-7402为研究对象，通过MTT实验、平板克隆形成实验、流式细胞凋亡术、Western Blot实验分别观察扶正化瘀含药血清对肝癌细胞株的增殖、集落形成能力、细胞凋亡和TGF-β1/smad信号通路相关蛋白表达的干预作用。
　　研究结果:(1)0.5％-20％的浓度之间的扶正化瘀含药血清显著抑制人肝癌细胞QGY-7701和BEL-7402细胞的增殖，且具有浓度依赖性。(2)0.5％-20％的浓度之间的扶正化瘀含药血清显著抑制人肝癌细胞QGY-7701和BEL-7402细胞的集落形成能力。(3)FCM凋亡检测发现，扶正化瘀含药血清处理后，人肝癌细胞QGY-7701和BEL-7402凋亡呈浓度依赖性增加。(4)扶正化瘀含药血清上调促凋亡蛋白Capase8的表达，上调肝癌细胞株中TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白表达，下调该信号通路下游靶基因肿瘤促进因子PAI-1的表达。
　　研究结论:扶正化瘀含药血清抑制肝癌细胞增殖和克隆形成，促进肝癌细胞凋亡，上调促凋亡蛋白Capase8蛋白的表达，干预TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白表达。其抗肝癌作用机制可能是通过干预TGF-β1/Smad信号通路实现的。

目录

声明

摘要

中英文缩略词表

前言

第一部分 理论研究

第一章 祖国医学对肝癌的认识

1、病名及沿革

2、病因认识

3、病机认识

4、肝癌的中医药治疗进展

第二章 现代医学对肝癌的认识

1、概念及发病率

2、病程及发病机制

3、TGF-1β／smad信号通路与肝癌

第三章 扶正化瘀方治疗肝癌的理论基础

1、扶正化瘀方治疗肝癌的理论依据

2、现代医家运用扶正化瘀法治疗肝癌

3、扶正化瘀方对肝癌的相关现代研究

第二部分 实验研究

1、实验目的

2、实验材料

2．1 药物及细胞株

2．2 主要材料与试剂

2．3 主要仪器与设备

3、实验方法

3．1．细胞培养

3．2．MTT检测细胞增殖

3．3．平板克隆形成实验(Colony Formation)

3．4．FCM检测细胞凋亡

3．5．蛋白免疫印迹分析(Western Blot)

3．6．统计方法

4、实验结果

4．1、细胞增殖结果(MTT)

4．2、细胞克隆形成结果

4．3、扶正化瘀含药血清诱导肝癌细胞凋亡

4．4、Westem Blot结果

第三部分 讨论

1、从扶正化瘀法论治肝癌

2、扶正化瘀方对肝癌细胞的抑制作用

3、TGF-β1／smad信号通路在肝癌发病中的作用

4、扶正化瘀方对TGF-β1／Smad信号通路的干预作用

5、总结及不足

参考文献

攻读硕士学位期间取得的学术成果

致谢