加味茵芍散含药血清对大鼠肝星状细胞增殖及TGF-β1/Smad信号通路影响机制探讨

摘要

肝纤维化是多种致病因素作用于肝脏，导致细胞外基质(extracellular matrix，ECM)过度沉积，肝内纤维结缔组织异常增生，最终导致肝脏功能及结构异常改变的病理过程。研究发现，肝星状细胞(Hepatic stellate cells，HSC)是肝纤维化过程中的效应细胞，也是肝纤维化治疗中的靶点细胞。而转化生长因子β1(transforming growth factorbeta1，TGF-β1)及Smads信号通路则是中医药抗肝纤维化的主要信号传导通路。在肝纤维化的发生过程中湿、热、毒、瘀、虚等是其基本病理因素，“湿热”、“血瘀”、“正虚”共存则是其基本病机特点。加味茵芍散是基于清热祛湿活血扶正原则所立之方，集驱邪与扶正为一体。既往研究发现茵芍散能够抑制鸭乙肝病毒的复制、延缓肝纤维化进程。因此探讨加味茵芍散对TGF-β1/Smad通路影响机制及对肝星状细胞增殖的影响，将为临床肝纤维化的治疗提供理论基础和多种治疗手段。
　　目的:本实验旨在通过观察加味茵芍散药物血清干预下肝星状细胞增殖情况以及TGF-β1、Smad3 mRNA和蛋白表达情况，进一步探讨清热祛湿活血法抗肝纤维化的作用机制，为临床肝纤维化的治疗提供理论基础和多种治疗手段。
　　方法:选成年、雄性Wistar大鼠随机分为三组，分别给予生理盐水、中药煎液、己酮可可碱灌胃，喂养一周后，予以腹主动脉采血，制备含药血清。血清设置为六组，为生理盐水血清干预组（阴性对照组）、己酮可可碱血清干预组（阳性对照组）、空白组、加味茵芍散药物血清低剂量干预组、加味茵芍散药物血清中剂量干预组、加味茵芍散药物血清高剂量干预组。含药血清干预大鼠肝星状细胞(HSC-T6)后，用MTT法检测加味茵芍散对HSC-T6增殖的影响，并予以实时荧光定量PCR、Western blot检测TGF-β1、Smad3 mRNA和蛋白表达情况。
　　结果:加味茵芍散有效抑制HSC-T6增殖和TGF-β1/Smad通路中TGF-β1、Smad3的mRNA和蛋白表达，与对照组比较有统计学差异(P＜0.05），且具有量效与时效关系。
　　结论:加味茵芍散能够抑制HSC增殖，其机制可能与下调TGFβ1、Smad3的表达、阻断TGF-β1/Smad信号传导通路有关。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 文献研究

1 肝纤维化的中医病名认识

2 肝纤维化的病因病机认识

3 肝纤维化的辨证论治

3．1 证型分析

3．2 常用治法

第二部分 实验研究

1、材料

1．1 细胞系

1．2 动物

1．3 药品及试剂

1．4 主要仪器

2、方法

2．1 分组

2．2 药物血清制备

2．3 细胞培养方法及分组

2．4 MTT法检测

2．5 PCR检测TGF-β1、Smad3 mRNA表达

2．6 Western blot(蛋白质印迹)检测TGF-β1、Smad3蛋白表达

2．7 统计学分析

3、结果

3．1 MTT比色法检测加味茵芍散对HSC-T6增殖的影响

3．2 加味茵芍散药物血清对TGF-β1、Smad3 mRNA表达的影响

3．3 加味茵芍散药物血清对TGF-β1、Smad3蛋白表达的影响

第三部分 讨论

1 加味茵芍散配伍组成及现代研究

2 加味茵芍散含药血清抗肝纤维化机制探讨

第四部分 结论

参考文献

文献综述

致谢

作者简历